趋化因子配体16参和心肌梗死过程及其对巨噬细胞吞噬功能的影响.pdfVIP

趋化因子配体16参与心肌梗死过程及其对巨噬细胞吞噬功 能的影响 硕士研究生：肖志诚导师：杜杰首都医科大学附属北京安贞医院 【摘要】 研究背景心肌梗死是冠心病的常见类型，炎症在该过程中起重要作用，但 炎症的发生及发展的具体机制尚不明确。其中巨噬细胞可以通过吞噬坏死心肌细胞影响远期 心脏重塑过程。已知趋化因子可以介导炎症细胞浸润，而细胞膜表面受体可以影响细胞的粘 附及功能，研究发现趋化因子配体16同时具有这两种功能。近年研究发现在冠心病心肌梗 死患者血浆中趋化因子配体16浓度增高，并与急性冠脉综合征的严重程度呈正相关，与长 期病死率密切相关，提示趋化因子配体16在心肌梗死后心脏损伤中可能发挥重要功能。但 趋化因子配体16是否参与心肌梗死过程，及其是否影响巨噬细胞的功能仍不清楚。 研究目的通过手术结扎小鼠冠状动脉前降支复制小鼠心肌梗死模型，明确趋化因子配 体16在心肌梗死早期是否升高；体外通过腺病毒转染巨噬细胞过表达趋化因子配体16，明 确趋化因子配体16对巨噬细胞吞噬功能的影响。旨在阐明趋化因子配体16在心梗中的部分 作用机制，以期为心肌梗死的治疗提供新的思路。 研究方法 1．野生雄性C57BL／6J小鼠50只按随机数字表随机分为心肌梗死组和假手术 组，每组各25只；心肌梗死组开胸结扎小鼠冠脉前降支，假手术组只给予开胸处理。 2．术后立即行心电图检查。 3．显微超声检测心肌梗死后28天小鼠心脏结构及功能。 4．ELIsA检测心肌梗死后3天外周血清中趋化因子配体16的表达。 5．HE染色观察心肌梗死后3天和28天心脏组织的结构改变和炎症浸润。 6．免疫组化检测心肌梗死后3天和28天趋化因子配体16和Mac一2的表达。 7．免疫印迹法检测心肌梗死后3天Mac一2表达。 8．马松染色观察心肌梗死后28天心脏胶原沉积。 9．体外实验分离小鼠骨髓单核细胞，刺激分化为巨噬细胞后转染趋化因子配体16腺病 毒及绿色荧光蛋白作为对照，并与小鼠心脏细胞碎片共培养，流式细胞仪检测巨噬细胞吞噬 功能。 研究结果1．与假手术组相比，心肌梗死手术后小鼠即刻出现心律加快及sT段抬高。 48．92％±5．46％， 2．小鼠心脏超声显示心肌梗死组左室射血分数降低(13．29％±2。83％vs P0．01)。 3．心肌梗死后3天时外周血趋化因子配体16水平上调[(1079±176)vs(6ll±37) pg／ml，PO．05]。 4．心肌梗死后3天时梗死区心肌细胞坏死，细胞结构消失，梗死交界区大量炎症细胞浸 润；28天时坏死细胞清除，炎症细胞消退。 5．连续切片免疫组化染色可见趋化因子配体16在心肌梗死后3天表达上调 FivehCon蜘e冉t}ntemal{o冉毒Ion C锑fe惜nceC矗嘲洒va嚣euI毒f0ise毒毒e a喇3昏year Anzhen to Annlvers矗嗒№e￡{fq醛Begln9Hosp妇f耋醐atedea酏矗{MedicafU和}vers耐 一60R一 }、R、0 $一、t～j一 的位置较一致；Mac一2在心肌梗死后3天 2％±0．34％vs0．48％±0．08％，P0．01)， 心肌梗死后28天表达降低。 6．免疫印迹法显示心肌梗死后3天心脏组织Mac一2表达上调。 7．Masson染色显示心肌梗死后28天梗死区胶原沉积。 8．流式细胞术检测可见巨噬细胞转染趋化因子配体16腺病毒后吞噬功能增强 (17．11％±0．87％vs7．91％±0．71％，PO．01)。 研究结论1．小鼠心肌梗死早期外周血趋化因子配体16表达上调，心脏组织炎症细胞 浸润，趋化因子配体16在巨噬细胞浸润部位表达，晚期消退。 2．体外趋化因子配体16在巨噬细胞过表达能促进其对细胞碎片的吞噬作用。 综上所述，心肌梗死后早期外周血及心脏组织原位趋化因子配体1