毛细管电泳安培检测法用于7-甲基鸟苷与丝裂霉素的研究.pdfVIP

毛细管电泳安培检测法用于7一甲基鸟昔和丝裂霉素的研究 何幸 张兰’ (福州大学化学化工学院，福州，350002,E-mail:zlan@fzu.edu.cn) 7一甲基鸟昔 (7-Methylguanosine，简称7MG)是一种修饰核昔，它是DNA被甲基化剂基 因损伤的主要产物之一 1〔]。修饰核昔不像正常核昔可以被降解或被重新利用而随尿原形排 除，因而尿中修饰核昔的排量可以反映体内细胞的增殖状态。丝裂霉素C(MitomycineC，简 称MMC)是抗生素类抗癌药物，对于胃癌、肠癌、肝癌等有较好的疗效，但是有较强的骨髓抑 制毒性2【]，因此对其服用量进行监测和个体化给药是必要的。本文采用了灵敏度较高的安培 检测法[3]同时测定肿瘤标记物和抗癌药物，有望通过考察抗癌药对修饰核昔的抑制程度，表 征药物的治疗效果，以及找出抗癌药物使用的平衡点，这对于降低服用抗癌药的不良反应， 了解抗癌药在体内的代谢原理都是一项很有意义的1作。 1.实验条件的选择 1.1电化学性质与电极电位的选择 在pH为9.4,20mmol几的NaaHP0,-NaOH缓冲溶液中以三电极系统作静态循环伏安图，考 察7MG与MMC在微石墨圆盘电极上的电化学行为。证明了7MG与MMC在微石墨圆盘上均具有电化 学活性，因此可以用安培检测法测定。 进一步考察了动态电极电位对7MG与MMC峰电流的影响，选择950mV作为最佳电极电位。 1.2运行液浓度与pH值对分离的影响 ’ 运行液体系不但影响缓冲液的电渗流，而且还会影响溶液中被分离物质的离解，因此对 分离的影响很大。试验了不同的缓冲体系，最终选择NaHP04-NaOH缓冲溶液(pH=9.4,20mmol/L) 为运行缓冲液。 1.3分离电压与进样条件的影响 当毛细管管长和内径选定以后，分离电压是影响电渗流大小的最直接的因素。试验了分 离电压对分离的影响。结果表明，当分离电压为18kV时，分离效果最佳。 通过对进样时间的考察，本实验将进样时间选定为10s。为了方便实际操作，也选择18 kV为进样电压。 综合上述试验，本体系选择的分离检测条件为进样时间:10s;进样电压和分离电压均 为 18kV:运行液为pH=9.4,20mmol/L的NaaHP0,-NaOH缓冲液:电极电位为950mV。在上述 最佳条件下，两组分在8分钟内达到基线分离。 2.线性范围与检测限 在本实验中，依据上述最佳条件对系列7MG与MMC标准混合液进行测定，从而得到线性 回归方程，相关系数和最低检测限，如表1所示: Table.lRegressionequation,linearrangesanddetectionlimitsof7MGandMMC Detectionlimits Linearranges Compound Regressionequation (S/N=3) (gg/mL) (gg/mL) 7MG I=0.1013C+0.065 0.9997 0.50-50 0.050 MMC 1=0.0916C+0.1496 0.9998 0.50-50 0.025 I:peakcurrentW)，C:concentrationofthestandards(pg/mL) 3模拟尿样、血清与回收率的测定 将该方法用于测定模拟兔血清和模拟尿样溶液，7MG和MMC的回收率均大于93.0%，结 果令人满意。 793 t加 in 图1模拟兔血清样品的CE图 Fig.1Electr