毛细管区带电泳-电化学检测法用于鸟苷、7-甲基鸟苷、6-巯基嘌呤与8-氮杂鸟嘌呤的研究.pdfVIP

毛细管区带电泳一电化学检测法用于鸟昔、7一甲基鸟昔、 6-琉基嗦吟和8一氮杂鸟漂吟的研究 陈毅挺1,2张兰 ‘陈昌梅 陈国南 ‘ (，福州大学化学化1学院，福州，350002,E-mail:zlan@fzu.edu.cn ，闽江学院化学与化学工程系，福州，350108,ytchen@fzu.edu.cn) 目前临床使用的抗癌药物基本上都有很大的副作用，抗癌药物在抑制肿瘤细胞增殖的同 时，也会对正常细胞造成很大的损伤川。因此，将抗癌药物与正常核昔同时进行检测，以获 得抗癌药物对正常细胞的损伤信息，迫切需要分析工作者建立一种能够快速检测分离这几种 物质的方法。而正常核普、修饰核昔和抗癌药物的同时检测还未有人尝试过。本文首次采用 毛细管区带电泳一安培检测法同时检测了正常核昔 (鸟昔)、肿瘤标记物 (7一甲基鸟昔)和 抗癌药物 (6-琉基嚓吟和8-氮杂鸟嚓吟)，试图为抗癌药物的研究和临床应用提供一种有效的 方法。 .实验条件的选择 .1电化学性质和电极电位的选择 在含鸟昔(G),7一甲基鸟昔(7-MG),疏基嗦吟(6-THI)和8-氮杂鸟嘿吟(8-AG)各600gg/mL 的Palitzsch缓冲液 (25mmol/L,pH8.31)中以三电极系统作静态循环伏安实验，实验结 果表明四种物质在碳圆盘电极上都具有电化学活性。 实验发现，当电极电位大于950mV(vs.Ag/AgCl)时，峰电流的增加趋于平缓，但基线，噪 声均急剧增大。为了获得最佳的信噪比((S/N=3)，本实验选择950mV作为最佳的工作电压。 1.2缓冲液体系的选择 试验了不同的缓冲液，综合考虑灵敏度、分离度和迁移时间等因素，最后选定25mmol/L 的Palitzsch缓冲液 (pH8.31)为运行缓冲液，该体系分离效果最好，且峰形尖锐对称。 1.3分离电压的选择 在以上条件下，考察了12^-24kV范围内的电压对分离效果的影响，考虑灵敏度、分离 度和分离效率等因素，在本实验中选择15kV作为分离电压。 1.4进样时间的选择 进样时间的控制，直接影响到测定的灵敏度和重现性。保持进样电压为 15kV，依次选 择进样时间为4^15s进行实验，最终选择10s作为最佳进样时间。 在上述最佳条件下，在长度为47cm的毛细管 ((i.d=25jim)中，四种组份在6min内得 到完全分离。说明该体系用于G,7-MG,6-THI和8-AG的分离，是快速有效的。 2.重现性、线性范围与检测限 在最佳工作条件下，每隔20分钟对各含10gg/mL(鸟昔为20gg/mL)的标准混合溶液进 行重现性实验，测得峰电流值和迁移时间值的RSD均小于3%(n=7)。对一系列不同浓度的标 准混合样品进行分析测定，以电泳谱图的电流峰高I(nA)分别对它们的浓度C印g/mL)进 行回归分析，得出各组分的线性回归方程、线性范围与检测限如表1所示。 鱼上-%鱼 7-里荃鸟查，流基嗓吟和8一氮杂鸟嗦吟的线性回归方程、线性范围与检测限 燮丝程旦鱼吵L)，工((nA) 相关系数R， 线性范围年g/mL) 检测限(pg/mL) G I=0.1332C+0.0129 0.9993 0.50^40 0.36 7-MG I=0.4993C+0.9336 0.9999 0.25-y20 0.11 6-THI I=0.9752C-0.1780 0.9997 0.25^x15 0.08 8-AG I=0.6719C-0.1111 0.9994 0.50^-15 0.15 3.模拟样品与回收率 785 将空白牛血清白蛋白溶液和牛血清白蛋白模拟样品溶液 (将一定量的标准混合溶液加入 牛血清白蛋白溶液制得)过滤后，直接进行毛细管电泳电化学检测，得到的电泳谱图如图1 所示。并测得四种组分的回收率在93.1%-97.8%之间，令人满意。 、。， (B) 图1牛血清白蛋白样