人类β3GalT7%2fGNT8(UDP-Gal%3abetaGlcNAc+beta1%2c3-galactosyltransferase+polypeptide7)催化功能的研究以及该基因表达和转录因子ets-1的相关性的探索.pdfVIP

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2017-08-14 发布于安徽
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人类β3GalT7%2fGNT8(UDP-Gal%3abetaGlcNAc+beta1%2c3-galactosyltransferase+polypeptide7)催化功能的研究以及该基因表达和转录因子ets-1的相关性的探索.pdf

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『KlⅥ)cR兰青呆的高表达对绢白J4．口峙士m■ 人类β3GalT7/GNT8(UDP-Gal:betaGlcNAcbeta 1,3-galactosyltransferasepolypeptide7)催化功能的研究以及该基因表达与转录因子ets-1的相关性的探索吴艳徐岚吴士良* 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学系，苏州大学生化工程研究所，苏州， 215123 本文旨在对β3GalT7的催化功能进行进一步的验证研究，同时，对β1，3半乳糖基转移酶7的表达是否受到转录因子ets-1的调控进行初步性的探索研究。将原核表达载体 pGEX-6p-1，转化BL21大肠杆菌，IPTG诱导表达融合蛋白，复性，用GST亲和层析柱进行纯化；结合相关的受体和供体底物，建立β3半乳糖基转移酶和β3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的酶促反应体系，通过RP-HPLC观察反应前后洗脱峰的变化，利用高效液相色谱(HPLC) 进行酶活检测。义核苷酸的表达受到剧 i善糕寻阳二一种新型糖基转移酶：β3GalT7/GNT8基因的RNA 干扰表达载体构建及其细胞学表型功能的初步研究朱琍燕仇灏吴士良* 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学系，苏州大学生化工程研究所，苏州， 215123 β3GalT7基因是本实验室克隆到的一个新基因，本文旨在探讨β3GalT7基因在肿瘤细胞生长、浸润、转移中的作用。遵循RNA干扰目标序列的选取原则，利用互联网资源，对β3GalT7 基因mRNA序列设计四条可能的小干扰RNA(siRNA)，并且由PCR方法扩增得到带有RNA polⅢ启动子的siRNA内源表达系统，脂质体介导转染至人胃癌细胞株SGC7901，运用 RT-PCR方法检测转染后各细胞株β3GalT7mRNA水平的表达变化，筛选出其中β3GalT7抑制效率最高的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNAOligo，转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况，RT-PCR方法检测转染后细胞β3GalT7的表达，进一步鉴定该siRNA对β3GalT7 的抑制作用；将这段siRNA插入到RNA干扰真核表达载体pSilenCircle中，脂质体介导转染人胃癌细胞株SGC7901，经G418筛选后得到β3GalT7基因表达下调的亚克隆细胞株，同时利用本实验室已经构建的正义上调表达载体pEGFP-C1-T7，构建该基因的上调表达稳定细胞株。