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发酵工程与设备实验 决定摇瓶溶氧量的因素有哪些？它们如何影响摇瓶溶氧量？ 答：⑴摇瓶的透气性：8层纱布，纱布透气性越好，摇瓶溶氧量越大。⑵摇瓶的转速：转速越大，培养基流动越剧烈，增大与气体接触面积。⑶培养基的粘稠度：粘稠度越大，氧气越难进入，溶氧量越低。(4)菌种的形态、密度：若菌体密度大，则相对不易溶。 采用磷钼蓝法测定发酵液中的植酸酶活性实验中，空白对照中并未发生酶和底物的水解反应，但经过显示后，颜色却呈较深的蓝色，试解释其原因。 答：①磷钼蓝受热，易被氧化成蓝色还原物。②植酸钠中含杂质磷太多。③培养基中含有的P没有被利用完全 红曲米发酵实验中，为何要添加酸水？无菌酸水如何制得？ 答：是为了洗脱菌种，同时为红曲霉生长创造酸性环境。 制备：取一烧杯的蒸馏水，往水中加入乳酸并调PH至4.0.然后取10ml配制好的溶液于干净的试管中，密封包扎后，放入高压灭菌锅灭菌，即可得到无菌酸水。 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，为何选用植酸钙而不选用植酸钠？ 答：钠盐易溶解、钙盐难容，植酸钙被利用后易形成透明圈，从而筛选。 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，为什么不将脱氧胆酸钠溶液和氯霉素眼药水加入到筛选培养基中一起灭菌？ 答：①脱氧胆酸钠高温时会与铁盐反应。②氯霉素眼药水，生产过程中已经灭菌，若加入到培养基灭菌，高温高压会使其失活。 请详细说明产植酸酶黑曲霉的分离实验的实验原理。 答：以植酸钙为唯一磷来源的选择培养基，同时以透明圈法，从土壤中分离筛选产植酸酶的黑曲霉 产植酸酶黑曲霉的摇瓶发酵实验中，摇瓶的作用有哪些？ 答：①气体和营养分布均匀②强化传热，使温度保持恒定，不会出现局部温度过高③代谢产物分散④避免影响其他菌丝生长⑤防止细胞沉淀 植酸酶酶活力测定实验中，若显色后的反应体系测定吸光度值为2.23，说明什么问题？该如何调整实验方案？ 答：说明待测物浓度过大，应该稀释。 植酸酶活力测定时做标线的目的是什么？ 答：标线是反应吸光度与无机磷浓度之间的关系，待我们测的样品吸光度后即可在标线上读出对应无机磷浓度，从而进行酶活计算。 简述灭菌锅的使用方法及步骤。 答：①向锅内注入水至三脚架上边缘、进行预热。 ②放入物品，将直排气管并放入排气槽。 ③关盖，拧紧对应螺栓，打开开关加热 ④待压力达到0.05MPa，排冷空气，使压力归零。 ⑤使温度维持在121～126℃，20～30min，之后，打开排气阀，自然归零，开盖，取出物品存用。 试述试管棉塞的详细制作步骤。 答：①剪方形纱布②取方形棉花③对折棉花④紧卷棉花⑤纱布包紧⑥塞入试管并整理⑦扎线⑧去残角 试述锥形瓶棉塞的详细制作步骤。 答：①取适量棉花②对折③紧卷④取适当大小方形纱布⑤包紧⑥塞入锥形瓶并整理⑦将纱布对角，残角塞入纱布内 试述发酵瓶棉塞的详细制作步骤。 答：取8层纱布（取一张对折三次）→塞在瓶口内→整理纱布，使纱布与瓶壁接触处无折痕即可 试述平板菌落接种试管斜面的详细步骤。 答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒→点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开平板和试管塞→用接种环在平板上取一环菌丝接种到斜面上，盖上平板，塞上试管塞 试述摇瓶种子接种发酵瓶的详细步骤。 答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒→点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开瓶塞→用移液管从种子瓶量取适量菌液接种到发酵瓶中→盖上瓶盖，适宜条件下培养 试述红曲斜面孢子种接至三角瓶的详细步骤。 答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒→点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开无菌水试管塞和斜面试管塞→把无菌水加入斜面中，盖上塞子，震荡→在酒精灯旁打开摇瓶塞和斜面塞→用移液管从斜面上吸取适量孢子液，注入摇瓶中→盖上塞子，适宜条件下培养 植酸酶酶活力测定实验中，样品管与空白管的加样顺序有何不同？为什么不同？ 答：空白管：先加入TCA，再加入植酸钠，加入TCA后抑制了酶的活性，使后续反应不能进行。 样品管：先加入植酸钠，后加入TcA，植酸钠作为酶作用的底物，反应产生无机P，加入TCA后，反应终止。 通过空白管的对照，能够得知酶的活性 植酸酶酶活力测定实验中，Vc、植酸钠和TCA的作用各是什么？ 答：Vc：强还原剂，抗氧化能力强，显色液成分之一。植酸钠：酶作用的底物。TCA：使酶失活，终止反应 所培养的平板有没有可能得不到菌落？试分析得不到菌落的原因及措施。 答：有可能。原因：无菌水没有冷却，植酸钙未混匀，稀释后浓度小，没有目标菌 措施：①对样品进行富集②取稀释倍数低的稀释液③人为原因引起的可重新培养平板 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，平板中为什么要加入1%脱氧胆酸钠溶液？ 答：抑制真菌菌落菌丝生长速度，防止连成一片，有利得到单菌落，便于实验现象的观察。 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，氯霉素注射液或氯霉素眼药水为何不需要灭菌，加入有何作用？