实验一 蛋白质的等电点测定.docVIP

实验一 蛋白质的等电点测定 一.实验目的 １.掌握蛋白质的两性解离性质　 ２.学习测定蛋白质等电点的方法 二．实验原理 蛋白质是两性电解质，在溶液中存在下列平衡： pH＞pI pH = pI 　　 pH＜pI 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液酸碱度（ｐH值）的影响。当溶液的pH达到一定数值时，其颗粒上的正负电荷数目相等，在电场中，既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，如：在等电点条件下，蛋白质的电导性、溶解度最小，粘度最大。可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。 本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度来测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制成各种不同pH值的缓冲溶液。向各种不同的缓冲液中加入酪蛋白后。沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 三.实验器材 ：水浴锅、温度计、200ml锥形瓶、100ml容量瓶、吸管、试管等 四.试剂与材料： １.材料：酪蛋白 2.试剂： （1）0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 称取0.4g酪蛋白，加1mol/LNaOH10ml使其完全溶解，加水50ml，再缓慢加1mol/LHAc10ml(边加边搅拌,ＮaOH和 HAc的浓度和体积必须准确，加HAc时一定要慢)，定溶至100 ml。 (2)1.00mol/L醋酸溶液 (3)0.10mol/L醋酸溶液 (4)0.01mol/L醋酸溶液 五.实验步骤： （1）取同样规格的试管4支并编号，按下表顺序精确加入各试剂并混匀 试管号 蒸 馏 水 （ml） 0.01mol/LHAc (ml) 0.10mol/LHAc (ml) 1.00mol/LHAc (ml) 1 8.4 0.6 - - 2 8.7 - 0.3 - 3 8.0 - 1.0 - 4 7.4 - - 1.6 (2)向以上试管中各加入酪蛋白醋酸钠溶液1ml，加一管，摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH值依次为5.9 、5.3、4.7、3.5。观察其混浊度。静止10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。 六.结果及分析：第三管最混浊，pH4.7为酪蛋白的等电点。因为蛋白质在等电点条件下，溶解度最小。 七.思考题：何谓蛋白质的等电点？有何实用意义？ 答：蛋白质颗粒上的正负电荷数目相等，在电场中，既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。 了解蛋白质的等电点对蛋白质的分离纯化有重要意义：如：沉淀法、电泳法、离子交换法分离纯化蛋白质，其基本原理都是建立在蛋白质等电点的基础上。