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实验课名称：园林植物基因工程实验 实验课英文名称：ORNAMENTAL PLANT BIOTECHNIC EXPERIMENT 课程编号 适用专业： 大纲主撰人：樊金萍 课程简介 园林植物生物技术实验是一门重要的、前沿性的专业技术实验课程，已成为现代分子生物学研究以及生命科学研究中重要的手段。它已渗透到工业、农业、食品、医药和环保等各领域，为这些领域的快速发展提供了强有力的保障。因此，园林植物生物技术实验农业相关专业如园林专业实验课程，亦是其它生物学相关专业的重要选修课程。 园林植物生物技术实验是一系列分子生物学操作技术组成的技术体系，主要是培养学生的实践能力和创新能力。通过DNA重组、核酸杂交、基因文库的构建等一系列的技术操作，帮助学生加深理解与掌握基因工程原理，而且更重要的是培养学生将基因工程相关理论知识应用于生产实践，提高学生的实际操作能力。另外，通过该实验课程的教学可以培养学生在实践中发现问题、分析问题和解决问题的能力，成为培养学生开拓创新精神的有效途径。 实验教学目的和基本要求 通过园林植物生物技术实验课程的教学，使学生初步掌握植物生物技术实验的基本操作技能；增加感性认识，巩固理论知识；培养学生严肃认真、实事求是的科学态度和科学作风；提高学生分析问题和解决问题的能力。 在实验课的教学过程中，要求学生在每次实验前预习好实验指导中的相关内容、掌握实验目的和实验设计原理、了解实验操作的基本过程及注意事项。实验课上，教师必须认真讲解实验内容和操作要点，并正确演示操作程序，特别是有关实验仪器的操作规程；学生应仔细观察实验中出现的各种现象，如实记录实验结果和数据，并联系有关理论内容进行积极思考，认真分析实验结果；实验报告的书写要求简明扼要、字迹清楚、规范整洁、结果正确；实验过程中应注意勤俭节约、安全有序.实验结束后应及时清洗仪器、打扫实验室卫生、关闭好水电门窗；教师必须认真负责地巡视并检查实验教学中的各个环节，并认真评阅好实验报告。 二、实验考核方式及办法 考核方式：实验操作考试+平时成绩 实验操作考试（包括实际操作和笔试），占比70% 平时成绩：占比30%，考核方式：课堂考勤、等 三、教材及主要参考书 ⒈ 张献龙等， 植物生物技术 科学出版社 2003 ⒉ 吴乃虎， 基因工程操作原理 ( 上 ) 科学出版社 .2001 3. 王关林、方宏筠，植物基因工程原理与技术 第1版 北京 科学出版社. 1998 2 实验内容 2.1 配置PCR反应体系； 2.2 PCR程序设置； 2.3 PCR程序运行； 2.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果. 3 实验考核要求 3.1 掌握PCR的基本原理及应用； 3.2 掌握PCR的实验操作技术； 3.3 掌握PCR引物设计的原理及方法. 实验六 植物总RNA的分离、纯化及检测 1 实验目的 1.1 认识真核生物RNA的组成及分离的原理； 1.2 学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法. 2 实验内容 2.1 实验用所有器皿的DEPC（二乙基焦碳酸盐）处理, 保证操作过程中严格避免外源RNA酶的污染； 2.2 植物材料的采集； 2.3 植物总DNA的分离； 2.4 DNA的纯化、干燥及紫外检测. 3 实验考核要求 3.1 掌握植物总RNA的提取的原理； 3.2 掌握植物总RNA的提取的方法； 3.3 掌握各步骤的操作要点及RNA提取过程中各种试剂的作用. 实验七 RT-PCR技术 1 实验目的 1.1 了解并掌握RT-PCR技术的原理； 1.2 了解RT-PCR技术在基因工程操作中的应用； 1.3 掌握RT-PCR的过程及操作要点. 2 实验内容 2.1 模板的准备； 2.2 c-DNA的合成； 2.3 配置PCR反应体系； 2.4 PCR程序设置； 2.5 PCR程序运行； 2.6 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果. 3 实验考核要求 3.1 要求学生掌握RT-PCR技术的原理； 3.2 要求学生掌握RT-PCR的过程及操作要点； 3.3 学会分析和解决实验中出现的常见问题. 实验八 体外重组分子的构建、筛选及检测 1 实验目的 1.1 运用基因工程操作原理，学会体外重组分子的设计、构建、筛选及检测； 1.2 掌握DNA的酶切技术； 1.3 掌握DNA的回收与纯化技术； 1.4 掌握DNA的重组连接技术； 1.5 掌握细菌的转化技术； 1.6 掌握细菌的培养技术. 2 实验内容 2.1 载体的制备； 2.2 外源插入片段的制备； 2.3 电泳检测； 2.4 DNA的回收与纯化； 2.5