ARID2在原发性肝细胞癌中的异常表达及其机制探讨.pdfVIP

thatthe inherit to SOon．Itis of genes，and noteworthygenotype susceptiblegenesesophageal areas cancerinthe ofHenanhaveobvious thaL hi|gh-incidence regionaldistribution．Considering itwould somefundamentalbasisfor cancerto provide esophagealregionaldiagnosis，monitor， and earlyscreeningprognosisjudgrnents． areasin Keywords：high—incidenceHenan；esophagealcancer；inheritsusceptiblegenes； distribution polymorphism；regional ARID2在原发性肝细胞癌中的异常表达及其机制探讨 吕全军1，姬旭慧1，张玲2，张江波3，陈丹丹1，刘媛1，鲁凤民3 1．郑州大学公共卫生学院，郑州450001；2．河南省肿瘤医院，郑州450008；3．北京大学医学部基础医学 院，北京100191 摘要：目的检测ARID2基因在肝癌细胞系和原发性肝癌组织中的表达水平，探讨 ARID2与原发性肝癌发生发展的关系。方法应用荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测 ARID2在肝癌细胞系和组织中mRNA和蛋白表达水平，并通过启动子甲基化定量、miR．155 表达定量分析ARID2异常表达的原因。结果不同感染背景下肝癌细胞系和组织中ARID2 表达水平不同，差异有显著统计学意义 P 0．0002 。与正常肝组织相比，在HBV感染背 景的原发性肝癌中，ARID2在癌旁组织和肝癌组织中的表达水平呈逐步下调趋势。经去甲 基化或过表达miR-1 55处理后细胞系中ARID2表达水平均有不同程度上调或下调。结论 ARID2在正常肝组织和肝癌组织中表达水平的差异提示ARID2可能与HCC的发生发展相 的调节作用相关。 关键词：人源ARID2蛋白；肝肿瘤：肝炎病毒，乙型；基因表达模式分析 Carcinoma,HCC 是最常见的消化系统恶性肿瘤之一【1，2】。 原发性肝细胞癌 Hepatocellular 目前认为，抑癌基因的功能缺失和致癌基因的激活与HCC发生密切相关，但其分子机制尚 未明确【31。 ． ARID2 AT-richinteractivedomain 2 位于人体12号染色体，由21个外显子组成。其 蛋白N端含有一个能与AT富集的DNA区域相互作用的保守结构域、一个翼状螺旋结构域 和一个脯氨酸及谷氨酰胺富集的结构域，C端含有2个C2H2锌指结构域【4】o现有报道多为 测序方法检测ARID2突变水平，尚无对ARID2在HCC中表达水平的检测。本研究检测了 ARID2在不同肝癌细胞系、正常肝组织、不同感染背景下肝癌组织及相应癌旁组织中的表 达情况，并尝试从两个方面分析了其低表达的影响因素。 1资料与方法 1．1—般资料 切除获得标本105例，取其癌组织及配对癌旁组织 距离病变2cm ，7例对照肝组织取自 肝脏良性病变男性患者，均经患者同意 签署知情同意书或其他伦理方面书面文件 。标本 离体后立即取材，于半小时内冻存于液氮内。所有标本均经术后病理学确诊，患者术前未 接受过放化疗。 SNU387、SMMC7721和Hep3B均由北京大学病原生物学教研室提供。 Real．TimePCR 多克隆兔抗体 Abcam公司 ，实时荧光定量PCR仪 LightCycler,480 Instrument，Roche I SYBRGreenMaster ，RPMl1640培养液 GibcoBRL，USA 。 Cycler,480 1．3 ARID2在细胞系和肝癌组织中mRNA表达水平的检测Real—time PCR扩增体系20山， 58℃退火30秒。双副孔，取平均CT值。以CTBP为内参计算目的基因表达水平【6I，见表 1。 Real．time 表1 PCR扩增基因弓f物序列 注：S为上游引物；A为下游引物 1．4 水平数据由北京大学病原生物学教研室提供【7】。 f8】o 1．6统计学处理应用SPSS12．0统计软件包，用符号秩和检验和Kruskal．Wallis符号秩和检 验分析配对癌组织和癌旁组织、正常组织与配对癌组织和癌旁组织的表达差异，检验水准n 005。 2结果 2．1ARID2在肝癌细胞系和ItCC组织中的表达水平与ARID2在正常肝组织中的表达水 82中ARID2表 系中，仅SNU449细胞系A