喹噁啉类药物遗传毒性与细胞毒性作用机理研究进展.pdfVIP

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第-f．次研讨会 依据残差及收重残差对各种同定效应的散点图等评价验证组数据拟合结果的优劣。最后合，F研究组及验证组数据， 以NONMEM程序得iIj最终的药动学参数群体典型值、同定效应参数值，并充分探讨丫年龄、体重、泌乳量、mj青生化 指标等对药动学参数的影响．为以后该类研究提供参考，并促进了群体药功学发展，使之更好地{瞒控I临床药物，优化个体 给药方案：加快新药研发． 喹噫啉类药物遗传毒性和细胞毒性作用机理研究进展 肖希龙。陈倩，靳溪，邹家杰，张婷，刘风英，汤树生 (巾罔农业人学动物医学院．北京，100J93) 唆咏啉类药物足一类喹嚼啉-I，4--氧化物，主要包括喹咧嗪、卡巴氧、喹乙醇、喹烯酎、乙酰甲喹等，由于其具有 良好的抗菌促生长性能，被用作食源性动物促生长饲料添加剂””．目前此类药物ff．,lsi床一卜应用较普遍的足卡巴氧、喹乙 醇、喹烯酮，其中卡巴氧主要在美国和加拿人使用，喹乙醇主要在澳人利亚、巴西、r|本及中国使用，喹烯酮主要在我国 使用¨’。现有实验证明卡巴氧和喹乙醇具有遗传毒性盯41，欧盟已认定卡巴氧和喹乙醇是致突变物和可疑的致癌物招“，同 时JECFA也认定卡巴氧为遗传毒性和致癌性物质啪。。鉴于卡巴氧和喹乙醇的遗传毒性和潜在致癌性，欧盟己于1999年禁 止其作为动物促生长饲科添加剂使用Ⅲ1。虽然喹烯酮在小鼠骨髓微核实验和染色体畸变分析实验中结果均为阴性，但在 Ames实验、hgprt基因突变实验、彗星实验和RAPD实验均显示其具有遗传毒性效心‘昝“． 因此，为了阐明该类药物遗传毒性和细胞毒性作用机理，本课题组以人HepG2细胞为研究模型，通过一系列实验从氧化 性DNA损伤，线粒体损伤和细胞周期调控等方面进行了深入研究n“矧。 1．遗传毒性 首先。奉课题组应用pSPl89／Vero细胞系统检测此三种药物的诱变性，结果表明三种药物中卡巴氧和喹乙醇均能诱 发靶基因核苷酸序列突变，表现为点突变、缺失和单碱基插入，以诱发点突变为主m“1。其次，我们还应用双核微核实验 和单细胞凝胶电泳实验榆验了卡巴氧，喹乙醇和喹烯酮对HepG2细胞的遗传毒性，结果显示三种药物均能诱导HepG2细胞 DNA断裂。增加细胞的双核微核率m。“矧．此外，本实验室还曾应用双核微核实验和单细胞凝胶电泳实验检验了卡巴氧， 喹乙醇和喹烯酮对Vero细胞的遗传毒性，结果亦娃示三种药物均能诱导Vero细胞DNA断裂啪1．综合上述结果，可推测此 三种药物均有一定的遗传毒性． 2．氧化性DNA损伤 首先．我们分别用卡巴氧、喹乙醇和喹烯酮处理HepG2细胞，结果细胞核和细胞浆中8一羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG， 氧化损伤的敏感标志物懈1)含量均呈剂量依赖性升高，表明药物诱导细胞发生氧化性DNA损伤。然后，我们对三种药物处 理后的细胞内的总R0s水平及各种抗氧化酶进行检测，结果表明三种药物处理细胞后．细胞内ROS生成量均增加，超氧化 活性均受到抑制。由此可见，三种药物处理细胞后，均诱导细胞内部氧化还原平衡破坏，细胞内ROS水平升高，造成细胞 出现氧化应激反应，导致细胞氧化性DNA损伤． 3．线粒体损伤 线粒体是R0s生成的主要部位，我们通过荧光染料罗丹明123对三种药物处理后的线粒体膜电位进行检测，结果表 明三种药物均能引起线粒体膜电位下降．接着，我们利用钙黄绿素一棚的荧光强度变化与膜孔开放程度密切相关的原理进 行试验，结果表明三种药物处理细胞后线粒体膜电位的下降伴随着膜通透性转换孔(MPTP)的开放．同时，我们通过 Fluo-3AM染色、分光光度法等方法证实三种药物处理细胞后细胞内游离Ca2+浓度升高，线粒体发生肿胀．另外，我们用 polymeraseY、 Long—PcR、荧光定量PcR等方法检测到三种药物均能同时损伤mtDN^和nDNA，下调mtDNA复制关键酶DNA 性以及干扰复制关键基因mRN^表达．导致mtDNA拷贝数下降，引起线粒体数量发生改变．据此，我们认为线粒体损伤可 能参与了此类药物的毒性作用机制。 4．细胞周期s期阻滞及调控途径 我们通过实验发现三种药物诱导细胞}l；现生长抑制和DNA损伤效应，改变细胞形态，应用流式细胞术检测药物处理 组细胞周期分布结果表明三种药物诱导细胞周期S期阻滞．应用荧光定量PCR方法检测到药物处理