犬精液冷冻技术地研究进展.pdfVIP

第二部分兽医外科学论文集 小动物软组织损伤部分 剖特点和疾病的性质，熟练掌握外科治疗学的方法和治疗技术，并依据动物的品种、年龄、性别 及病程等，采用相应治疗方法。切忌拘泥于一种经典的和传统的方法。 参考文献(略) 犬精液冷冻技术的研究进展 杨应华，钟友刚，施振声 (中国农业大学动物医学院·临床兽医系产科，北京100193) 摘要：犬精液冷冻技术及人工授精(artificial 内容。国外已对犬精液冷冻技术进行了大量深入的研究并将该技术应用于生产，而国内尚处研究 试验阶段。本文主要从精液采集、评估、稀释、冷冻和解冻方面对国内外犬精液冷冻研究进行综 述，以期为国内犬种繁育技术的发展提供参考和借鉴。 关键诃：犬；精液；冷冻；进展 精液冷冻保存是人工授精技术的一项重火革新，它解决了精液长期保存的问题，使精液不受 时问、地域和种畜生命的限制。世界上养犬业发达的国家如美国、澳大利亚和意大利等，采用冷 冻精液进行人工授精已成为一个完整的服务体系。自从1969年Seager第一次报道了应用解冻后的 犬精液人工授精使母犬成功产仔之后，人们就开始对犬精液冷冻进行了大量的研列¨。目前的国 外研究中，平均冻融精子活力在50--60％之间，最高可达70％左右[21，也有国外商业机构承诺解冻 活力高达解冻前的70％以上；而国内的研究起步较晚，已发表的文献显示冻融精子活力多在 3050％之间，最高达54％【3l，所以尚有很大提升空间。 1精液采集 目前最常用的犬精液采集方法是按摩法，该法简便安全并且可以选择性地收集精液富集部 分。发情母犬的诱导可以提高公犬的精液质量，也可使用蘸有发情母犬阴道分泌物的冷冻棉签进 行诱导。附睾中的精子也可进行冷冻保存，方法类似于正常采集的精子的冷冻，且解冻后的精子 具备同射m的精子一样的功能【4l，该法可用于意外死亡或不得不去势的优良种公犬。 2精液评估 鲜精及解冻后的精子都需要进行评估，评估的最终目的就是预测精子受精能力。传统的评估 项R包括精液外观、体积、精子浓度、活力及形态学等。随着研究的深入，更细致多样的方法被 应用，包括精子质膜完整性、顶体状态、DNA完整性、透明带结合法、卵母细胞结合法等，而最 有说服力且最终的检测方法就是人工授精后母犬的受孕率及产仔率。在众多评估方法中，精子密 度、活力和质膜完整性是F1前研究中最常用的三个指标。 2．1精子浓度 常规的精子浓度是利用白细胞计数板进行人工计数。利用特殊的光度{t(SpermaCueo， Minitube)也可进行精子浓度的测最，前提是精液比较干净。 2．2活力 活力是精液评估中应用最普遍的评估参数。传统上活力是在普通光学显微镜或相差显微镜下 由人工估量，但因受主观性影响较大，已渐被计算机辅助精液分析系统所取代，因为后者能客观 地评估活力和密度外，还能提供运动速度、尾部摆动频率等其它运动参数。 2．3精子质膜完整性 第_部分冉医外科学论文集 小动物软组织损伤部分 质膜在维持完整的细胞内环境和保持精子活力上起着重要作用。质膜完整性的检夼可分为头 部和尾部质膜完整性检畲。头部质膜完整性F1前多用夕匕活双荧光染色法进行染色，并用荧光显微 镜或流式细胞仪(flow Swelling，HOS)法进行检测，原理是尾部质膜不完整的精子会在低渗环境下发生尾部卷曲。该法 需要在相差显微镜下进行检查。 3稀释 精液冷冻前要经稀释，稀释液组成和稀释方法都会影响精子的质最。 3．1稀释液组成 稀释液的组成包括冷冻稀释液、冷冻保护刺和其它添加；}!l。经多年研究，含20％卵黄及适量 葡萄糖或果糖的Tris．柠檬酸缓冲液已成为应用最普遍的冷冻稀释液。葡萄糖与果糖是应用最多的 糖类，M．Aksoy等发现同浓度的果糖、乳糖和木糖优于葡萄糖等其它常见糖类15l。人们一直试图 寻找卵黄的替代品，D．Benchari群从蛋黄中提取出了97％纯度的低密度脂蛋白(10w 较。精液解冻后发现LDL组的活力、顶体完整率、质膜完整率及DNA完整率都显著高于20％蛋黄 组，而且发现LDL的理想浓度是在6％。他们随后采用含6％LDL的稀释液进行犬精液的冷冻并得 到100％(n=6)的受孕率l们。该