山西省猪链球菌血清型调查病理学及研究.pdfVIP

２０１３ 年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会 暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会论文集 山西省猪链球菌血清型调查与病理学研究 郭雪丽，李红丽，王红宝，韩惠英 （山西省农科院，太原 ０３００３２） 　 　 摘要：研究目的：根据ＳＳ荚膜多糖（Ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＣＰＳ）抗原性的不同，可将猪链球菌（Ｓｔｒｅｐ⁃ ｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｓｕｉｓｓｅ，ＳＳ）分为３５个血清型（１～３４，Ｉ／ ２），其中，血清型ＳＳ１、ＳＳ２、ＳＳＩ／ ２、ＳＳ７、ＳＳ９ 和ＳＳ１４ 为临床 上的主要致病血清型。 本研究通过鉴别ＳＳ谷氨酸脱氢酶（Ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｏｇｅｎａｓｅ，ＧＤＨ）和主要致病血 清型抗原编码ＣＰＳ基因的差异，设计５对寡核苷酸引物，拟建立多重ＰＣＲ检测体系，以实现ＳＳ种和６种 主要致病血清型的检测，并对致病菌感染猪群进行病理学研究，研究探索出山西省猪链球菌病的流行规 律，主要血清型的存在地区，致病性血清型的分布区域，及其发病后的病理组织学变化。 材料方法：对山西 省３０多个规模化猪场疑似猪链球菌病的病死猪进行剖检，无菌采集发病仔猪心、肺、肝、脾、肾、关节分泌 物、病变淋巴结和血液等病料，以及喉拭子进行致病性链球菌的分离。 结合涂片、染色、镜检，分离培养，生 化试验，致病力等细菌学检查，对初步的鉴定的菌株通过多重ＰＣＲ法进行检测、分型并进行毒力分析，分 离出致病菌株，并进行毒力分析。 对由致病菌株发病猪的血液抺片，肝脏、脾脏和肺脏病变部位触片，病料 用组织切片制作技术及其ＨＥ染色技术，对其病理组织学变化进行观察和研究。 结果：根据谷氨酸脱氢酶 基因设计的ＳＳ种特异性引物可检测出绝大多数ＳＳ，总检出率为８０％（１４４／ １８０）。 ６４株检为阴性的菌株 均为非致病性血清型（１３型、１９型、３０型、３２型、３３型，３４ 型）。 ８０株分属于６种主要致病血清型（１型、２ 型、Ｉ／ ２型、７型、９型和１４型）。 对致病菌株的溶血素（ｓｌｙ）、胞外因子（ｅｐｆ）、溶菌酶释放蛋白（ｍｒｐ）这三个 主要毒力相关基因进行克隆和核苷酸序列分析未发生变异。 病理组织学研究发现：死猪耳廓、颈下、腹下 和四肢末端皮肤可见紫红色出血斑点；脾脏出血点隆起，边缘“锯齿”样突起，有出血梗死区；关节肿胀，有 大量黄色渗出物，关节窝有骨骼样赘生物。 组织学表现为脏器组织呈不同程度的出血以及嗜中性粒细胞 浸润等。 讨论：本研究说明山西省的养猪场内ＳＳ多种血清型同时存在，多重ＰＣＲ技术在ＳＳ分子诊断方 面具有较大应用价值，可以为养殖户选用具有针对性的血清型预防疫苗提供依据，减少猪链球病的发病 率，从而达到控制本病的目的。 主要参考文献： － ［１］　 ＷＩＳＳＥＬＩＮＫ ＨＪ，ＪＯＯＳＴＥＮＪＪ，ＳＭＩＴＨＨＥ．ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲａｓｓａｙｓｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ ｓｉｘｍａｊｏｒｓｅｒｏｔｙｐｅｓａｎｄｔｗｏｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔ⁃ － ｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ ｉｎ ｔｏｎｓｉｌｌａｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｒｏｍ ｐｉｇｓ［Ｊ］． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４０，２９２２ ２９２９ ［２］ ＳＭＩＴＨ Ｈ Ｅ，ＶＥＥＮＢＥＲＧＥＮ Ｖ，ＶＥＬＤＥ Ｊ Ｖ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｃｐｓ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ ｓｅｒｏｔｙｐｅ １，２ ａｎｄ９：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｐｉｄ ｓｅｒｏｔｙｐｅ－ － ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９９，３７（１０）：３１４６ ３１５２ ［３］ ＳＭＩＴＨ Ｈ Ｅ，ＶＡＮ ＢＲＵＩＪＮＳＶＯＯＲＴ Ｌ，ＢＵＩＪＳ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ ＰＣＲ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ