磷酸化研究总结.pptVIP

* * 大麦光系统II蛋白磷酸化对渐进水分胁迫的响应 实验进展总结及初步讨论 光合组 刘文娟 高等植物的光合作用由两种与膜相连的色素蛋白复合物介导：光系统I （PSI）和光系统II （PSII），其中PSII 催化水的氧化和质体醌的还原。 研究背景： 磷酸化是蛋白翻译前修饰的最常见的形式之一，在调节从基因表达到信号和代谢调控等所有细胞功能中都起作用。 高等植物类囊体膜蛋白的磷酸化最初是通过高光强诱导发现的（Bennett 1977），此后的大多数研究都以光照作为首选环境条件研究光系统主要功能性蛋白磷酸化的变化，目前发现的PSII中能够发生磷酸化的主要蛋白有D1、D2、CP43和PsbH亚基以及捕光色素蛋白复合物LHCII等。随后又有研究发现包括温度、pH值、盐离子浓度等其它环境因子的改变也会引起不同程度的PSII蛋白的磷酸化。 高等植物类囊体膜蛋白的可逆磷酸化对环境是依赖的，表明高等植物的光合反应机构对周围环境具有一定的适应和调节能力（Aro和Ohad 2003）。 水分胁迫作为一种外界环境诱导因素，会使植物细胞因失水而造成膜结构的破坏，活性氧水平升高，光系统尤其是光系统II的功能蛋白稳态水平表达下降， 光合活性降低。 本试验的目的在于：研究渐进水分胁迫（PEG 6000 处理0、24、48、72h）下大麦叶片PSII主要功能蛋白D1、D2、CP43、LHCII复合体等的（去）磷酸化水平变化，探讨高等植物光合机构对水分胁迫这一环境因素的适应机制。 研究结果： 光合生理参数 PSII光化学活性 结论： 水分胁迫引起的大麦光合速率的下降可能与气孔因素与非气孔因素都有关； 水分胁迫对PSII造成更大的影响，使PSII的光化学活性、量子产率、光化学淬灭能力均显著降低； 1-qp参数的变化反映出质体醌氧化状态水平的显著升高，表明随着水分胁迫程度的加深，反应中心及捕光色素蛋白的磷酸化水平可能升高； 加入磷酸酶的抑制剂NaF后，所有光和参数水平均未能恢复至对照水平，对于PSII情况尤为如此，说明蛋白的去磷酸化过程对水分胁迫下光系统的保护机制尤为重要，为之后蛋白水平的研究奠定实验基础。 蛋白水平研究 PSII主要功能蛋白的磷酸化水平研究 PSII主要功能蛋白的去磷酸化速率研究 D1 LHCII b1 CP43 LHCII b4(CP29) 类囊体分区研究蛋白迁移 温和电泳研究LHCII单体—三体变化 各种蛋白酶及磷酸酶在类囊体各区的分布变化 Alexander V. Vener (Plant Physiol. 2000) 结论： 反应中心蛋白DI、D2，内周天线蛋白CP43: Eva-Mari Aro (J. Biol. Chem., 1996） Alexander V. Vener (Biochim. Biophys. Acta., 2007) 水分胁迫下，反应中心蛋白通过蛋白去磷酸化速率的加快，加快蛋白降解； 单子叶植物大麦类囊体结构可能区别于双子叶植物，类囊体垛叠区含量较低，且在基粒区域仍有一定量蛋白酶的分布； *