3结构与功能1.ppt

渗透休克法（osmotic shock） 又称冷休克，其原理是根据突然改变渗透压并使细胞发生物理性裂解。 主要步骤：将细胞放在用Tris缓冲液配制、含EDTA（已二氨四乙酸）的20%蔗糖溶液中保温，使其发生质壁分离，接着快速的用4摄氏度的0.005mol/L氯化镁溶液稀释并降温，使细胞外膜突然破裂并释放周质蛋白。经离心即可从上清夜中提取周质蛋白 5）特殊细胞壁的细菌： 某些G＋的分枝杆菌和诺卡氏菌： 细胞壁含有大量霉菌酸（Mycolic acid－一种支链羟基脂质） 与感染能力有关； 简单染色很难使 其着色 6）细胞壁缺陷细菌： 缺壁突变——L型细菌 人工去壁 基本去尽—— 原生质体（G+） 部分去除—— 球状体（G-） 实验室或宿主 体内形成 在自然界长期进化中形成——支原体 缺壁细菌 * * 第三章 微生物的 结构与功能 第一节 真细菌（Eubacteria） 一、一般形态及细胞结构 （一）个体形态和排列 球状 杆状 螺旋状 基本形态 （二）大小 1、范围 （nanobacteria）（50 nm） 最大和最小细菌的个体大小悬殊： （Thiomargarita namibiensis）（0.75mm） 1 亿~ 10 亿倍 （二）大小 1、范围 一般细菌的大小范围： 0.5 ~ 1 mm （直径） 0.2~ 1 mm （直径） × 1~ 80 mm（长度） 0.3~ 1 mm （直径） × 1~ 50 mm（长度） (长度是菌体两端点之间的距离，而非实际长度) 参见P31 （二）大小 2、测量方法 显微镜测微尺 显微照相后根据放大倍数进行测算 参见P31 （二）大小 3、细菌大小测量结果的影响因素 个体差异； 干燥、固定后的菌体一般会由于脱水而比活菌体缩短1/3-1/4； 染色方法的影响，一般用负染色法观察的菌体较大； 幼龄细菌一般比成熟的或老龄的细菌大； 环境条件，如培养基中渗透压的改变也会导致细胞 大小的变化。 参见P31倒数第1段 （三）细胞的结构 特殊构造：部分细菌具有的或一般细菌在特殊环境下才有的构造 一般构造：一般细菌都有的构造 （三）细胞的结构 1、细胞壁 1）概念： 细胞壁（cell wall）是位于细胞表面，内侧紧贴细胞膜的一层较为坚韧，略具弹性的细胞结构。 1、细胞壁 2）证实细胞壁存在的方法： （1）细菌超薄切片的电镜直接观察； （2）适当的质、壁染色，可以在光学显微镜下看到细胞壁； （3）机械法破裂细胞后，分离得到纯的细胞壁； （4）制备原生质体，观察细胞形态的变化； （三）细胞的结构 1、细胞壁 3）细胞壁的功能： （1）固定细胞外形和提高机械强度； （2）为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需； （3）渗透屏障，阻拦酶蛋白和某些抗生素等大分子物质（分 子量大于800）进入细胞，保护细胞免受溶菌酶、消化 酶和青霉素等有害物质的损伤； （4）细菌特定的抗原性、致病性以及对抗生素和噬菌体的 敏感性的物质基础； （三）细胞的结构 4）革兰氏染色与细胞壁： （1）革兰氏染色 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色 （1）革兰氏染色 （1）革兰氏染色 表3-1 革兰氏阳性和阴性细菌细胞壁成分的比较 （2）革兰氏阳性细菌的细胞壁 特点：厚度大（20~80nm）， 化学组分简单，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。 结合在革兰氏阳性细菌细胞壁上的一 种酸性多糖（P 41第三段） 肽聚糖(peptidoglycan) 磷壁酸（teichoic acid） 又称粘肽(mucopeptide)、胞壁质(murein)或粘质复合物(mucocomplex)，是真细菌细胞壁中的特有成分。 （P 40第一段） 1、细胞壁 A、肽聚糖 四肽尾由四个氨基酸分子按 L型与D型交替方式连接而成 双糖单位中的β-1,4-糖苷键很容易被溶菌酶(lysozyme)所水解，从而引起细菌因肽聚糖细胞壁的“散架”而死亡。 肽桥起着连接前后两个四肽尾分子的“桥梁”作用。 青