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内皮抑制素摹因在大肠癌中的表达及其临床意义 371
内皮抑制素基因在大肠癌中的表达及其临床意义
孝作祥郑树方永明潘月龙
内皮抑制紊(EIld06totin)是胶原XⅦ的COOH一末端片段,其分子量为20000。是一个进入
临床试验研究的新的血管生成抑制子“J。体内外的动物实验研究证实,nld0嘲血在体内显示
其恶性肿瘤的临床分期和患者预后密切相关“J。本研究通过RT—PcR方法检测了43例大肠
床分期和病理参数的关系。
材料与方法
《一)研究对象
随机选择本院收治的大肠恶性肿瘤手术病人43例。男性19例,女性24例。年龄介于
癌24例,管状乳头状腺癌11例,黏液腺癌7例,印戒细胞癌l倒。组织分化程度为高分化13
例,中分化21例,低、未分化9例。
I二)基因mRNA水平表达的测定及分析
所有的检测标本均来自外科手术切除的新鲜组织。经仔细检查分离出癌组织和远离癌肿
15
m的相对正常组织,立即置于液氮中,以用于之后的分析检测。细胞总RNA的抽提采用
Trizol
dNTP
2m,
50
h,然后95℃5rain并立即置冰浴中
加灭菌超纯水至总量20皿。在室温置10ndn,420C反应1
mmol/LdNTPl
mmol/LM酗2.5}d,10 m,7r蛔DNA聚合酶(2U,阻)0.5m(以上试剂均购自
TakaRa公司),正义引物(10
pm棚阻)与反义引物(10
5’一A 7。PCR反应
Di画诅l
Science Marker为相对分子量质量标准,
1D—gohKge,Vemion3.0软件分析系统,以DL2000DNA
作者单位:310啷杭州,浙江大学肿瘤研究所
中国癌症研究进展@
对值。
(四)统计学分析
应用SPSS Test和Kmskal—Wallis1锄检验,分析肿瘤组
10.0统计软件,以Mann—Whitney
的关系。以P0.05为有统计学意义。
结 果
(一)大肠癌组织与其正常大肠组织的Endostatin表达
达,同时进行内对照口一actin的检测。43例大肠癌组织End06tatin表达(O.9244-o.376)明显高
于正常大肠组织(0.4494-0.227)。两组比较,有显著性差异(P=0.000)。
圈1El一PcR产生的tndestatin基因、内对照基嗣表达示例
M:IX.2000fh蠢k;1.2:大肠癌组织;3,4:JE常丈肠组织560
bp处为相对
应样本的endeetafin基因条带370坤处为内对照P一曲基因条带
表达 .
达(1.147
篓 doetatin表达(O.8144-0.331)。两组比较,有显著
翟
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