microRNA-103下调Dicer1对卵巢癌侵袭转移影响及其机制探讨.pdfVIP

中华肿瘤防治杂志 2014年 11月第 21卷第 22期 CHINJCANCERPREVTREAT，November2014，Vo1．21 No．22 《前沿报道／论著 microRNA一103下调 Dicerl对卵巢癌 侵袭转移影响及其机制探讨 杨宗元 魏晓 周晓水 刘毅 龚成 高庆蕾 华 中科技大学同济医学院附属 同济医院肿瘤生物医学中心，湖北 武汉 430030 【摘要】 目的 探讨卵巢癌细胞 中microRNA一103对 Dicer1的调控作用以及对侵袭转移 能力 的影 响，研 究其作用分子 机制。方法 收集华 中科技大学同济 医学附属 同济 医院 2009—02—01—2012—07—02确诊为浆液性卵巢癌 患者石蜡切片共 135例 ，免疫组织化学检测配对原位转移卵巢癌病灶 ，高低级别浆液性卵巢癌病灶 Dicerl表达水平 ；收集武汉 同济医院 2013-01—03—2013-03—20新鲜卵巢癌标本组织和正常卵巢标本各 5例 ，提取 RNA后 qRT—PCR法 比较卵巢癌组织、正常 卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞 中miR-103表达差异 ；用生物信息学的方法特异预测出miR-103特异作用 Dicerl位点，后通过双荧光素酶报告体 系进行验证 。上调 miR-103表达后 ，蛋 白质 印迹法检测 Dicerl的表达变化 ；上调 miR一103或下调 Dicer1水平后 Transwel1实验观察 卵巢癌细胞迁移侵 袭 能力 的改变；Confocal观察 EMT相关分子 N—cadherin的表达。结果 Dicer1在卵巢癌发生发展过程中表达下降，转移灶与原位灶相 比显著表达下调， 一15．0， P0．01；高级别浆液性癌较低级别 Dicer1明显表达下调 ，Y一21．4，P％0．01。miR 103在上皮性卵巢癌组织的相对表 达量为4．28±1．22，较正常卵巢(O．69±0．13)明显增加 ，t一一6．381，P一0．002；同时在卵巢癌细胞 系中相对表达量为 3．71-+-1 ． 36，较正常卵巢上皮细胞 (O．98i-0．19)显著增加 ，t一一4．851，P一0．005。荧光素酶报告系统示 ，miR一103能特 异结合 Dicer1—3一UTR 区域 ；卵巢癌细胞 系 SKOV3中过表达 miR-103后其迁移细胞数 目为 77．5±8．4，较对 照组 (17．5±3．1)明显增加 ，差异有统计学意义，一一21．44，P0．001；侵袭数 目为5O．7±4．2，较对照组(13．5±1．3)增加显 著 ，差异有统计学意义，￡一一19．74，PO．001。Dicerl蛋 白水平被显著抑制 ；DicerlsiRNA 下调 Dicer1水平后卵巢癌细 胞系sK0V3(t一16．67，P0．001)和 cAOV3(一18．63，P0．001)迁移侵袭能力增加；miR-103过表达或Dicer1一si后 细胞形态呈现间质化改变，间质标志分子 N—cadherin表达 明显上升 。结论 miR-103在卵巢癌 中作为一个促癌 miR促 进 卵巢癌侵袭转移 ，其分子机制是通过下调 Dicer1介导卵巢癌细胞 EMT的发生 ；抑制 miR103或恢复 Dicer1水平可能 成为上皮性卵巢癌治疗的有效方法。 【关键词】 卵巢肿瘤 ；微小 RNA-103；Dicerl；上皮问质转化 ；N—cadherin 中华肿瘤防治杂志 ，2014，21(22)：1757—1763 M icroRNA一103promoteovariancancermetastasisthroughtargetingDicerl YANG Zong—yuan，WEIXiao，ZHOU Xiao—shui，LIU Yi，GONG Cheng，GAO Qing—lei DepartmentofCancerBiology