基因工程酶法结合酵母能量耦联高效合成L谷氨酰胺的研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( )! *’ ) # 年 月 !$ % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,- !$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 基因工程酶法结合酵母能量耦联高效合成 谷氨酰胺的研究 ! / ! # ! / 陈群英 陈国安 薛 彬 张显久 殷志敏 / （南京师范大学生命科学学院，南京 !/7F ） ! （无锡江南大学科技园，无锡 !/$ ） # （南京大学生命科学学院，南京 !/7! ） 摘 要 通过 方法从 基因组 中扩增出谷氨酰胺合成酶基因（ ），克隆至表达载体 GHI .+0#,,) )3/#,# J*K 1,$4 ，经测序鉴定后转化大肠杆菌 （ ），用 及乳糖诱导表达。 分析表明，所表达的谷氨酰 L8!0M 6N!/ J# OG84 1J1.GK4 胺合成酶（ ，简称 ）为可溶性蛋白，约占总菌蛋白的 。利用表达的 蛋白 端的 P(QR,?@C: S-CRB:R,S: 41 0 T 41 * ; U V@S. 8,P 对 进行亲和层析，将获得的纯蛋白进行酶活性测定。结果表明，纯化的 合成反应的最适温度为 ，最 41 41 ;W ! Y 适 为 ， 能明显提高 的活性和稳定性。工程菌 （ ） 粗提物中 的比活是宿主菌 LV ; X% +C 41 6N!/ J# Z L8!0M.P(CK 41 本身的 倍。以谷氨酸、 和 为底物的转化实验表明谷氨酸的转化率达 以上。经筛选获得一株高效 0$ *V H( K8G 7% T $ 能量耦联酵母菌株，命名为[H/；通过能量耦联表明，该系统对谷氨酸的转化率高达0 T ，平均谷氨酰胺产量为 !!PZ N。 关键词 谷氨酰胺合成酶，诱导表达，能量耦联，高效转化 中图分类号 文献标识码 文章编号 （