shRNA沉默Bmi-1质粒构建及对鳞癌细胞ECA109增殖的影响.pdfVIP

中 国 医学 科 学 院 学 报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE · 论 著 · shRNA沉默 Bmi-1质粒构建及对鳞癌细胞 ECA109增殖的影响 周 明，耿松梅 西安交通大学第二附属医院皮肤科，西安 710004 通信作者：耿松梅 电话 ：029电子邮件 ：gsm312@yahoo．col／l 摘要 ：目的 研究shRNA沉默Bmi．1基因对鳞癌细胞ECA109增殖变化的影响，探讨Bmi一1基因在鳞癌细胞增殖中 的作用。方法 采用RT．PCR和Westernblot法分别检测Bmi一1在Fibroblast细胞、Hacat细胞、A431细胞、ECA109细胞中 的表达。构建重组质粒 GPU6／GFP／Neo—shBmi．1，脂质体转染ECA109细胞后，检测细胞中Bmi一1表达变化。MTF法检测 转染前后细胞抑制率，流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果 与Fibroblast细胞和Hacat细胞相比，Bmi-1在鳞 癌细胞系A431、ECA109中含量明显升高。重组载体GPU6／GFP／Neo—shBmi-1构建成功，转染ECA109细胞后Bmi-1表达 明显降低 (P0．05)。与对照组相比，转染后细胞增殖明显受到抑制 (P0．05)；G1期细胞明显增加 (P0．05)，s期 细胞明显减少 (P0．05)。结论 Bmi一1与细胞恶性增殖相关。在ECA109细胞中沉默Bmi-1，可改变细胞周期，从而抑 制细胞增殖。 关键词：Bmi一1；shRNA；ECA109；鳞状细胞癌 中图分类号：R73—3 文献标志码：A 文章编号：1000-503X(2015)01·0017—06 DoI：10．3881／j．issn．1000-503X．2015．01．004 ConstructionofshRNA．Bmi．1PlasmidandItsEfiectonProliferationofECA109Cells ZHOUMing，GENGSong—mei DepartmentofDermatology，theSecondAffiliatedHospital，Xi’anJiaotongUniversity，Xi’an710004，China Correspondingauthor：GENGSong-mei Tel：029E-mail：gsm312@yhaoo．corn ABSTRACT：Objective ToexploretheroleofBmi—lgeneintheproliferationofsquamouscarcinoma cellsandwhetherthesilencingBmi．1Callinhibitthegrowthofsquamouscellcarcinomascells．Methods The expressionsofBmi．1inprimaryculturedFibroblasts．karatinocytecelllineHacat，,squamouscarcinomacellline A431．andECA109weredetectedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction (RT—PCR)andWestern blotanalysis．RecombinantplasmidinsertedwithBmi．1geneshorthairpinRNA (shRNA)expressionvector PGPU6／GFP／Neo—s