中国鲎β-actin基因的克隆与组织表达.pdfVIP

第 54卷 第 2期 厦门大学学报 (自然科学版) Vol_54 NO．2 2015年 3月 JournalofXiamenUniversity(NaturalScience) M ar．2Ol5 中国鲎~-actin基因的克隆与组织表达 李文杏，黄静茹，叶海辉 ，黄辉洋 ，李少菁 (厦门大学海洋与地球学院，福建 厦门 361102) 摘要 ：中国鲎(Tachypleustridentatus)是一种古老的海洋动物．利用 RT—PCR和RACE等分子生物学技术 ，获得中国 鲎 肌动蛋 白基 因(中国鲎~actin，简称为 TTBA)全长 eDNA序列，总共 1515bp，包括 7Obp5非编码 区(untranslated regions，UTR)、314bp3UTR和一个1131bp的开放 阅读框 (openreadingframe，ORF)．ORF可编码 376个氨基酸残 基 ，总分子质量约为41807．7u．同源蛋 白的序列 比较结果显示 ，TTBA推导氨基酸序列与其他物种具有很高的相似性， 推测fl-actin基因具有很高的遗传保守性．而基于 aetin蛋 白序列比对而绘制的系统进化树显示中国鲎与其他节肢动物 具有较高的相似性，此结果与其现行的分类地位基本一致．以Real-timeRT-PCR法检测表 明，在卵子发生各期的卵巢组 织中TTBA表达量保持稳定 (p0．05)，可作为定量检测的内参基因． 关键词 ：中国鲎；~actin基因；克隆；组织表达 中图分类号 ：Q781 文献标志码 ：A 文章编号 ：0438—0479(2015)02—0188—06 肌动蛋白(actin)普遍存在于真核生物 中，它是细 发生各期卵巢组织中的表达情况 ，为进一步研究该基 胞骨架和肌节的主要成分，其在进化上高度保守．肌 因的结构和功能奠定基础 ，同时也为定量技术过程 中 动蛋白几乎参与 了细胞 的所有生理过程 ，如细胞分 选择可靠的内参基因提供理论依据． 裂 、染色体运动、细胞器运动等[1]．它有多种类型 ，根 据不同的等电点可分为 a、B、73种_l】引． 肌动蛋 白 1 材料与方法 (fl-actin)基因不但序列高度保守，且 mRNA表达量大 而稳定 ，因而在很多需量化 的实验技术 (如 RT—PCR、 1．1 材 料 Northern杂交)中被当作内参照[63． 1．1．1 动物及组织材料 鲎是一种古老的海洋底栖动物，具有重要 的科研 中国鲎购 自厦门市大学路农贸市场，挑选处于卵 意义和药用价值．鲎在寒武纪就 已经 出现 ，直到现在 巢发育各期的个体 ，实验室暂养一周后选用健康 、 形态并无重大变化 ，故人们称其为 “活化石”_7]．鲎与 附肢完整 的个体．取 20mg卵巢组织立 即置于液氮 三叶虫有非常近 的亲缘关系 ，因此对 鲎的生物学研究 中，用于总 RNA提取．取 100mg卵巢组织用 Bouin 在节肢动物系统发生研究 中有一定 的意义 [8]．中国鲎 固定液 (固定液配置体积分数为 ：75 苦味酸，25 甲 (Tachypleustridentatus)，又名三刺鲎 ，隶属于节肢 醛，5 乙酸)进行固定 ，经 7ffm 切片后 ，以苏木精和 动物门(Arthropoda)，肢 口纲 (Merostomata)，剑尾 目