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链球菌检验作业指导书 主题内容与适用范围本规定了的检验方法。本适用于的检验。引用标准GB/T 4789.28　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂3　设备和材料3.1　。3.2　。3.3　温箱：36±1℃，42℃。3.4　显微镜。　　3.5　灭菌广口瓶：500mL。3.6　灭菌三角烧瓶：500mL，250mL。　　3.7　灭菌吸管：10mL、1mL。　　3.8　天菌平皿：90mm×15mm。　　3.9　灭菌小试管：内径3mm，长5cm。　　3.10　灭菌毛细管。　　3.11　5mL、10mL　　　　3.12　橡皮乳头。　　3.13　载玻片。　　　　3.14　酒精灯。　　3.15　灭菌金属匙或玻璃棒。　　3.16　接种棒、镍铬丝。试管架、试管篓。　4　培养基和试剂　　4.1%葡萄糖肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。4.2　按GB 4789.28中4.规定。4.3　按GB 4789.2中4.规定。%氯化钠肉汤：见附录A1。按GB 4789.28中.9规定。4.7　按GB 4789.中.21规定。4.8　蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28中3.13规定。4.9　氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB 4789.28中3.12规定。4.10　糖发酵管：按GB 4789.28中3.2规定。4.11　A1。 4.12　杆菌A4。　　4.13 CAMP 试验A5。 4.14 胆汁-七叶苷试验：见附录A6 4.15 6.5%NaCl生长试验：见附录A7。 4.16 Optochin 敏感试验A3 4.17 吡咯烷酮芳氨酶( PYRase) 试验A9。 5　检验程序5%CO2环境中培养，然后用血琼脂平板进行分离培养。如无菌生长应连续培养7天，无论是否有菌生长均应再次转种血琼脂平板进行分离培养。 6.2 涂片染色：链球菌为革兰球菌单个成A、B、C、GCAMP、PYR、VP、及β-D-葡萄糖苷酶（BGUR）等试验区别（表1）。 表1 来自人类β-溶血链球菌的特性鉴别 菌种 Lancefield群抗原 菌落a PYR VPb CAMP BGUR※ 化脓性链球菌 咽峡炎链球菌群b 无乳链球菌 停乳链球菌马样亚种d 咽峡炎链球菌群c 咽峡炎链球菌群c 停乳链球菌马样亚种d 咽峡炎链球菌群e 咽峡炎链球菌群f A A B C C F G G 未分群 大 小 大 小 小 大 小 小 ＋ － － － － － － － － － ＋ NA － ＋ ＋ － ＋ ＋ － ― ＋ － － － － － － NA NA NA ＋ － NA ＋ － NA 注：a：＋阳性；－阴性；NA，无资料；b,VP试验，无乳链球菌无意义；c曾命名S.mellcri或称米勒链球菌；d:最近资料提示来自人类β-溶血性含C、G群抗原菌落形菌株提议命名停乳链球菌马样亚种，在种水平上相关联。目前根据发酵海藻糖和山梨醇活性，区分其他含C群抗原菌种。※BGUR＝β-D-葡萄糖苷酶 表2 来自人类和动物含Lancefield C、G群抗原的 β-溶血性小菌落形菌株的特征鉴别 菌种 Lancefield抗原 宿主 海藻糖 山梨醇 停乳链球菌马样亚种b 停乳链球菌马样亚种b 马链球菌马亚种 马链球菌兽疫亚种 狗链球菌 C、G群 C、L C C CBGUR是阴性，相反大多数 β-溶血含Lancefield C、G的抗原的大菌落链球菌是阳性。 6.5.2 草绿色链球菌的鉴定：革兰氏阳性球菌，触酶阴性，草绿色溶血、胆汁溶菌阴性、Optochin阴性，不存在B、D群抗原，6.5%NaCl肉汤不生长，PYR阴性，10℃、45℃不生长、胆汁七叶苷阴性、万古霉素敏感。该类链球菌种类较多，首先推断性鉴定到群，参见表3、表4 表3 草绿色链球菌的鉴定 菌群 试验a 甘露醇 山梨醇 VP 精氨酸 七叶苷 尿酶 变异链球菌 唾液链球菌 缓症链球菌 咽峡炎链球菌群 ＋ － － －b ＋ － － －b ＋ ＋ － ＋b － － － － ＋ ＋ － ＋ － ± － － 注：：a：＋.阳性反应；－.阴性反应；±.有些菌株阳性而另外菌株阴性；B：偶见例外。 表4 缓症链球菌、咽峡炎链球菌、变异链球菌、唾液链球菌和牛链球菌的特性鉴别 试验 缓症链球菌群 咽峡炎链球菌 变异链球菌 唾液链球菌 牛链球菌 血液链球菌 副 血 液 链 球 菌 戈 登 链 球 菌 嵴 链 球 菌 口 腔 链 球 菌 缓 症 链 球 菌 泛 口 腔 链 球 菌 婴 儿 链 球 菌 咽 峡 炎 链 球 菌 星群链球菌 中间链球菌 变 异 链 球 菌 表兄链球菌 唾液链球菌 前庭链球菌 生 物 1b 生 物 2 b 生 物 3 b 星群亚种 咽炎亚种