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点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶基因的克隆与表达.pdf
卷 期 微 生 物 学 报
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年 月
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点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶基因的
克隆与表达!
李 民 陈常庆!!
（中国科学院上海生物工程研究中心 上海 ）
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王德宝
（中国科学院上海生物化学研究所 上海 ）
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摘 要：用活性筛选法从产气单胞菌点状亚种 （
+,#-(( !#$%$’( *+,’,’(*-( .*+,’,’
) ) )
）的基因组中克隆了脯氨酰内肽酶（ ，简称 ）的基因，测定
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2 66 6
了含有 基因的 片段的序列，第 编码了 个氨基酸组成的脯氨
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6
酰内肽酶，经检索是一种新的/0/基因。并构建了一株组成性高效表达.3.的基因工程菌
／ 。 ／ 在 培养基中 的表达量占菌体总蛋白的
CD$! E3F.3. CD$! E3F.3. GH :.3. (’I
6 6 6
左右，活力是野生菌的 倍，表达产物主要为可溶性的胞内蛋白，约 分泌到胞外。非还
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原 显示为单体，分子量为 ，与基因序列预测的分子量一致。试管培养后纯化
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得到了纯度大于 的重组脯氨酰内肽酶，比活力为 ／ 。
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L
关键词：脯氨酰内肽酶，大肠杆菌，克隆，高效表达
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
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脯氨酰内肽酶（ ， ）［ ］是一种能特异性水解小分
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