牛CIDE-C基因的克隆，序列分析和其原核表达.pdfVIP

·270· 第三部分 细胞工程与转基因 牛CIDE-C基因的克隆，序列分析及其原核表达 王琼，蓝贤勇，滑留帅，张良志，孙晓梅，胡沈荣，陈宏’ (西北农林科技大学动物科技学院， 陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌712100) 引言 DNA factorlike death effector，CIDE)家族参与细胞凋亡 DNA断裂因子相似蛋白(cellinducingfragmentation 和甘油三酯代谢调控。CIDE-C基因高表达于脂肪滴含量丰富的组织。该基因敲除后的小鼠白色脂肪组织显著减 少，基础脂肪分解增强。提示该蛋白参与了全身能量的平衡与调控。C伪E—C基因可能成为治疗肥胖相关代谢性疾 病的潜在靶点及研究动物生长发育的候选基因。本研究通过RT—PCR．方法成功克隆了牛CIDE-C基因完整编码 功能奠定了基础。 材料与方法 中斜体下划线部分是引入的EcoR 大肠杆菌BL21中。通过生物信息学软件对该基因进行相关分析。测序正确的重组载体经IPTG诱导，表达出预期 大小(28kD左右)的融合蛋白，经Westernblot证实确实为目的蛋白。 结果 利用RT—PCR技术从牛脂肪组织中获得预期大小的目的片段，序列分析表明，克隆获得的Cm弘C基因完整 ORF片段大小为669 kD，理论等电点为7．97。其 bp，编码1条长222个氨基酸肽链，编码蛋白预测的分子量为25 中带负电荷的残基为23个，而带正电荷的残基为24个，理论半衰期为30h。选择性剪接数据库(ASD)中该基因有 区(strand)。 PCR．纯化产物经EcoR mmoFL 诱导表达，优化后条件为27℃，0．5 IPTG诱导4h，与预期大小相符。上清液中的表达蛋白纯化后经 Western blot进一步证实了确实是目的蛋白。 讨论与结论 CIDE—c在大肠杆菌BL21中表达的蛋白质与预期大小一致。并通过Westernblot验证．确定其成功表达，这为以后 多克隆抗体的制备和进一步研究CIDE-C基因的功能奠定了基础。 关键词：牛；CIDE-C基因；克隆；原核表达 术体系专项(Nycytx一38)经费资助。 ·通讯作者。