人类免疫缺陷病毒gag基因的改造和其编码蛋白的分子免疫学特性研究.pdfVIP

508 第一届中国艾灌病性病防治大台论丈集2001ll13～16 人群中是一个加速AIDS的潜在因子。 吾尔族的基因变异率高于汉族，CCR2—641突变在延缓AIDS发病或病程方面产生一定的影响。 人类免疫缺陷病毒gag基因的改造及其编码蛋白的分子免疫学特性研究 州锦彦朱家鸿邵一鸣 卫生部艾滋病预防与控制中心参比实验室(北京市 100050) 摘要HIV疫苗需求非常迫切，以往艾滋病疫苗研究的重点是基困工程疫苗，尽管有些已进人人体试验， 但多因免疫原性不强或诱导免疫保护的能力较差，效果都不理想，因此须开展多途径HIV疫苗研究。马传染 性贫血减毒活疫苗为我国自行研制的拥有自主知识产权的目前世界上唯一的慢病毒疫苗，是研究HIV疫苗的 并观察HIV突变与来突变Gag蛋白的免疫学特征，为HIV疫苗研究开辟了新的研究思路。 通过EIAV各毒株计算机一级结构及二级结构的预测，分析一级结构的变异对二级结构的影响；同时对 HIV与EIAV Gag蛋白的一级结构和二级结构作了类比分析；分析结果表明HIV一1Gag蛋白与EIAV野毒 株Gag蛋白整体结构极具相似性，且大部分结构域相吻合，一级结构分析相对应的区域，其二级结构和结构域 基本相对应，从而确定了相对应于EIAV的变异位点的HIv位点，以及在二级结构上相对应的结构域。计算 机模拟突变并分析突变对蛋白质二级结构的影响，设计出与EIAV疫苗株相类似的HIV一1中国流行株 和CN549agM3，经测序证实均按设计引入点突变。 同源重组方法插入痘苗病毒天坛株TK区，经蓝白斑筛选构建了五个复制型重组痘苗病毒，分别为：rvv— 组病毒均已按设计重组了目的基因，经ELISA和Western Blot鉴定，各重组病毒均能表达Gag蛋白。以七株 单克隆抗体对五个重组痘苗病毒表达的蛋白进行了抗原表位分析，证明各重组痘苗病毒表达的蛋白均具有与 七株单克隆抗体相结合的抗原表位。5株重组痘苗病毒在电镜下观察到典型的痘苗病毒以及Gag蛋白形成的 颗粒，其中基因改造后表达的Gag蛋白所形成的颗粒密度较野生型要大。 五个重组痘苗病毒分别于0和4周肌肉注射免疫BALB／c小鼠，均能诱忸出小鼠特异性体液免疫9特异 周CTL反应检测结果显示经基因改造的Gag蛋白所诱导的CTL应答较野生型强。 结果表明：基因突变影响G靼蛋白的成颗粒特性，突变Gag蛋白形成的颗粒密度较野生型要高；表达突变 Gan蛋白重组痘苗病毒诱导小鼠体液免疫应答和表达野生型Gag蛋白重组痘苗病毒之间无差异，但其诱导小 鼠CTL应答的较野生型强，说明突变能增强Gag蛋白的免疫原性。