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486蟋》2011年学术年会
T030130
应用CSFV-E2基因噬菌体肽库筛选猪瘟病毒抗原表位
徐璐1汤波1’2范学政1黄伟2陈蕾1刘俊1’2王琴1
(1．中国兽医药品监察所，北京100081；2．西南大学荣昌校区，重庆荣昌402468／)
引言
猪瘟(ClassicalSwine SwineFever
Fever,CSF)是由猪瘟病毒(ClassicalVirus，CSFv)引起的猪的
高度致死性接触性传染病，对养猪业的危害极其严重。其囊膜糖蛋白E2是诱导机体产生中和抗体的主
要抗原蛋白，且E2的多表位融合蛋白在2次免疫后具有稳定的抗原保护效力，表明亚单位疫苗在猪瘟的
防治中潜藏着巨大的实用价值。本研究对CSFv-E2靶基因噬菌体肽库进行筛选，以期能够筛选得到更多
新的抗原表位。
材料方法
运用猪瘟单克隆抗体WH303、WH211和M56对SM—E2库，以200la∥孔、150la
g／孔、100lag／孔、50
uW-E包被于96：j：L酶标板内进行4轮生物淘洗，对阳性克隆再经噬菌体原位杂交、特异PCR澳IJ序分析，
然后人工合成阳性多肽进行ELISA反应。将第4轮回收的噬菌体进行原位杂交，观察结果。分别挑取原
位杂交呈现阳性色斑的噬菌斑，进行培养，以培养液为模板，加入T7上下游引物进行PCR反应，1．2％
心区域(ⅣS唧，R)送赛百胜人工合成短肽段与对应的猪瘟单抗进行ELISA试验鉴定。
结果
肽，表明本实验室构建的CSFVSM—E2库包含着完整的CSFVE2蛋白抗原表位基因。
讨论
本研究中选用的目标噬菌体肽库即是以CSFV石门株E2基因为初始模板，17噬菌体为载体构建成的
CSFV-E2基因17噬菌体随机多肽库，经过几重筛选鉴定，最终成功的筛选到了一个与报道的抗原表位
极为相似的多肽表位，表明在CSFV抗原表位的研究中选择靶基因肽库作为研究工具较目前使用的其他
方法更为特异有效，更能够从中筛选得到新的更接近真实结构的抗原表位。
参考文献
【1】徐和敏．猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位研究【D】．中国兽医药品监察所硕士学位论文．2007．
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【2】Yu EShiellJ，et envelope
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