显微镜在植物细胞程序性死亡中应用——从个体到群体.pdfVIP

电子显微学报J．Chin．Eleetr．Micrmc．Soe 25(增刊)：211—2112006年 21l 显微镜在植物细胞程序性死亡中的应用 ——从个体到群体—— ’ 姚楠 (中山大学生命科学学院，有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东广州510275) 显微镜是生命科学研究中不可缺少的手段和工 重功能。在植物抵御病原菌侵染以及诱导细胞死亡 具。不论是电镜还是新兴起的激光共聚焦等显微技 的过程中，ROS产生于细胞壁，细胞膜，线粒体，叶绿 术的应用，都对生命科学的研究和发展起到了相当 体等不同的器官中，定位ROS的产生源是研究其功 大的促进作用。突出的例子是动物细胞程序性死亡 能的关键之一。利用电镜氯化铯染色法，我们首次 (或称细胞凋亡)的概念首先是在形态学详细研究的 在植物PCD研究领域中发现在诱导细胞死亡过程 基础上提出来的。和动物细胞类似，植物细胞程序 中H202的产生和积累首先是在线粒体上，线粒体 cell death)发生在生长发育 性死亡(PCD：progranuned ROS迸发是植物PCD的一个具有普遍意义的重要 的各个阶段，从受精的胚珠到植物的老化以及在其 特征”1。结合荧光显微镜的观察以及细胞流式仪的 生长过程中对各种病原微生物的抵抗，PCD在维持 测定，在群体细胞的器官水平上进一步证实ROS积 内环境，自我平衡以及抵抗或防御性反应中起着至 累与线粒体膜电位的变化是植物程序性死亡共有的 关重要的作用。随着各种仪器和技术手段的更新和 早期现象，说明线粒体是植物细胞程序性死亡的调 发展，用细胞生物学手段观察细胞死亡过程及其信 控中心…。 号传导途径成为可能。 3诱导植物PcD的内在园子夏其信号传导 1应用EM-TUNEL技术区别和鉴定植物PCD和 寻找诱导死亡的内在因子是研究植物PCD机 坏死 制的关键。利用丰富的死亡突变体资源。我们首先 植物PCD是植物与病原菌相互作用以及植物 实现了用免疫电镜技术定位与死亡相关的内在因 器官发生中的普遍现象，如何正确的认识和判定 子。而后应用激光扫描共聚焦显微镜和标记细胞器 PCD是研究死亡现象的基础。长期以来PCD和坏 的荧光探针技术，在个体和群体的亚细胞水平上观 死的区别与判定一直没有一个清晰的形态学标准和 察这些诱导死亡的内在因子与线粒体膜电位的变化 成熟的方法。EM．TUNEL技术是一种把细胞超微结 以及ROS产生等生理信号的关系，同时在诱导细胞 构的观察和DNA断片化的位点相结合，对PCD进行 死亡过程中对活细胞及其器官在形态上的实时动态 定位和定量化测定的技术。应用这项技术我们发现 变化进行跟踪记录。至今为止，我们已发现 植物的PCD具有与动物细胞凋亡相似的形态特征： ProtoporphyrinIX(在叶绿素和亚铁原卟啉合成途径 典型的异染色质凝缩，DNA断片化集中于异染色质 中的一种中间底物)可能是一个在动植物中共同存 部位，细胞器特别是线粒体的完整性以及蛋白酶和 在的诱导死亡的内在因子“1。 核酸内切酶共同参与死亡过程等。与此特征相区 参考文献：