DNA甲基化在鸡Hsp70基因转录表达中作用.pdfVIP

．512． 第六部分 家禽遗传育种 甘建伉，罗庆斌，张细权 (华南农业大学动物科学学院，广东广州 510642) 引言 热应激蛋白基因lisp70是机体受到环境高温等应激时迅速产生大量热应激蛋白的诱导型表达基因，作为主要 表达的原因。本课题组对不同品种鸡Hsp70基因的多态性进行分析，发现了多处的碱基突变；比较不同组织不同基 HspTO基因表达存在组织差异性的原因，因此本研究试图从表观遗传的途径探讨DNA甲基化是否在HspTO基因 组织差异性表达中起着作用。 材料与方法 广东温氏南方家禽育种有限公司提供的矮脚黄雏鸡80只，饲养到8天龄时分成5组，每组16只，除对照组 外，其他组分别进行l、2、3、6小时急性热应激，分别采集大脑、肝脏和腿肌。组织RNA抽提采用Trireagent法 UniversalGenomicDNAExtractionKitVer (TaKana)，组织DNA抽提采用TaKaRa 3．0。实时荧光定量PCR检测不同 处理不同组织的HspTO基因mRNA表达水平；MassArraysystem方法分析了对照、3小时处理和6小时处理组不同 组织的HspTO基因启动子区的甲基化水平。 结果 急性热应激后lisp70基因被诱导表达。随着应激时间的增加mRNA水平也逐渐提高，到3h时表达量最高，其 中大脑表达量是对照的16倍，腿肌表达量是对照的4倍。组内比较HspTO基因mRNA表达水平显示，对照组腿肌 mRNA表达量是肝脏的9倍，大脑mRNA表达量是肝脏的2倍；应激3h时腿肌和大脑的mRNA表达量分别是肝 脏的47倍和22倍；而应激6 h时，腿肌和大脑的mRNA表达量分别是肝脏的12倍和9倍。MassArraySystem检测 Hsp70基因启动子区甲基化水平显示热应激前后不同组织的HspTO基因启动子区都是低甲基化，其中肝脏在对 照、3h处理和6h处理组的平均甲基化水平分别是11．56％，11．62％和12．63％；大脑在对照、3h处理和6h处理组 的平均甲基化水平分别是14．46％，12．77％和13．54％；腿肌在对照、3h处理和6h处理组的平均甲基化水平分别 是13．觎，13．0l％和13．03％。 讨论与结论 本实验结果说明鸡HspTO基因热应激后被诱导表达，其表达量随着应激时间的增加而逐渐提高，且lisp70基 因的表达存在组织差异性，但应激时间超过一定阈值后，机体耐受了这种应激。Hsp70的表达反而会降低。DNA甲 基化检查显示热应激前后不同组织的HspTO基因的启动子区甲基化水平差异不显著，并且始终维持着低甲基化水 平。表明Hsp70基因的组织差异性表达并不受该基因的甲基化影响，但总体平均甲基化水平的改变似乎与Hsp70 基因mRNA表达水平存在一定的负相关，这种现象在不同组织中也存在，即当mRNA表达水平高时．相应地其甲 基化水平却低一些。结论：鸡热应激蛋白70的组织差异性表达与该基因启动子区的甲基化水平无关；而热应激蛋 白70的热诱导表达是否与该基因的甲基化水平改变负相关仍需进行更多的检测才能确定。 关键词：DNA甲基化；鸡；HspTO基因