毛细管电泳法筛选蛋白质核酸适配体初步研究.pdfVIP

全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 C06毛细管电泳法筛选蛋白质的核酸适配体的初步研究 陈巍赵新颖屈锋¨ 北京理工大学生命学院，北京100081 evolution 核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化(systematicofligandsbyexponential 异性的寡核苷酸序列配体【1·21。毛细管电泳(capillary 用的亲和色谱、纤维膜过滤、凝胶电泳和磁珠分离等方法相比，分离过程简化，耗时短，分 离效率高，且不会引入其它分离介质，因此在适配体筛选中可有效避免适配体与分离介质的 非特异性作用。此外毛细管电泳技术还具有分离速度快，分辨率高，操作简单，样品用量少， 研究成本低等明显优势[3】ocE．SELEXF丁,成为一种新型的筛选核酸适配体的有效方法【41。 本研究采用平衡混合物的非平衡毛细管电泳方法研究三种蛋白质(BSA，RNase A，IgG) 与随机寡核苷酸文库的亲和作用，为后续的适配体筛选奠定基础。分别将小分子量的具有生 物功能的核糖核酸酶RNase A、中分子量的血清高丰度蛋E]BSA和大分子量的免疫球蛋E]IgG 与荧光标记的80nt的寡聚核苷酸反应，得到寡核苷酸文库与目标蛋白质的混合溶液。采用毛细 管区带电泳对混合溶液进行分离分析(图1)，表征蛋白质．DNA复合物的生成，并对其进行收 集鉴定。 实验结果表明，BSA与DNA库相互作用后没有明显BSA．DNA复合物峰的出现，但是游离 DNA的峰面积随着BSA浓度的增加明显降低，表明存在BSA-DNA复合物，但生成量极少，几 乎检测不到；RNaseA与DNA库相互作用后，可以明显的检测到复合物；IgG与DNA库相互作 用后，有新的小峰出现，并且随着IgG浓度的增加，该峰逐渐增大。结果表RNaseA并I]IgG对 寡核苷酸文库的亲和力较BSA对此文库的亲和力强。通过对目标蛋白质．DNA复合物迸行收集， 将收集产物分别通过PCR、凝胶电泳以及毛细管电泳鉴定，证明收集到了具有较高亲和性的二 级寡聚核苷酸文库。 国家自然科学基金No国家重 ”通讯联系人：屈锋，女，教授E-mail：qufengqu@bit．edu．ca． 点基础研究计划No．2007CB914101资助。 全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 图lBSA、RNaseA和IgG与DNA库作用的电泳图 参考文献 【1]TuerkC，GoldL．Science．1990，249，505．510 A J W，Szostak 【2]Ellington W．Nature．1990，346，818．822 1LReinemann f3】Stoltenburg cStrehlitzB．Biomolecular Engineering,2007，24：381-403 [4]DmbovichPA，BerezovskiM，KaylovNS，etcAnalChem．，2006，78。3171．3178