猪ETEC+F4受体微卫星标记筛选.pdfVIP

1 ANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 75 2010，VOLUME2，NO．1 猪ETECF4受体微卫星标记筛选 蒋隽，柳小春，何俊，黄生强，马海明‘ (湖南农业大学动物科技学院，长沙410128) 引言 仔猪泻痢是养猪生产中常见的疾病，肠毒素大肠杆菌(ETEC)是导致仔猪腹泻的最重 要的病原菌。E．coliF4(K88)是其中最常见的一种粘附素，因此F4受体研究对于猪的抗病 育种具有重要意义。本研究选择8对13号染色体上与F4ab受体连锁的微卫星标记，研究地 方猪种与外来猪种在这8个位点的遗传特性，并分析不同基凶型与F4受体粘附型的关系。 材料方法 本实验供试猪包括4个品种共453头，其中五指山猪165头、沙子岭猪139头、大白猪 237头、杜洛克猪212头。并沙子岭猪63头、大白猪60头进行了黏附测定。选择猪13号 buffer，0．2 U mmol／LdNTP，0．2I-unol／L 体系组成：50rig模板DNA，1xTaq primers，lTaq DNA聚合酶。PCR扩增程序：92℃预变性2min，94℃变性30S，72℃延伸30s，共33个 min。退火温度根据引物调整。取10 循环；最后72℃延伸7 gLPCR产物加2．5“L上样缓冲 液，8％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染法显色。同一泳道两个等位基因组成一种基因型。 根据Nei氏公式计算杂合度(H)和多态信息含量(PIC)。 结果与分析 4个猪种在8个基因座均具有高度多态性，杂合度在0．61170．7500之间，多态信息含 多态信息含量比外来品种略高，在S0222座位上则略低。在微卫星座位S0223和SW207， 两个猪种不同基因型在F4ab和F4ae血清型黏附表型上差异显著或者极显著，其中在册2刀 位点，AC基因型在沙子岭猪中F4ab黏附表型为25头，远高于不粘附型的7头，差异极显 著(pO．01)。基因型与F4ac粘附型的比较也表明不同基因型与粘附型差异显著。大约克 中也存在相同情况，AC基因型在沙子岭猪中F4ab黏附表型为27头，远高于不粘附型的8 头，差异极显著(p0．01)；对大约克基因型与F4ac粘附型的比较也表明不同基因型与粘 在显著相关，可能F4ab和ac受体就位于这2个位点附近(之间)。 讨论 有报道表明F4ab和F4ac受体精确定位于13号染色体长臂3．1区，并且2个基因座间 紧密连锁。本实验研究证实了这个看法。本研究结果表明，S0223和SW207微卫星与F4ab 和aC粘附性存在显著相关，表明F4ab和8C受体就位于这2个位点附近(之间)。这为抗性 猪的选择提供了可能，这两个微：卫星座位可望作为E．coliF4抗性基因的遗传标记。 ·通讯作者。