鹅PIT-1基因启动子区转录调控区初步鉴定.pdfVIP

·扬州- 第十六次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 ·537· 鹅川卜j基因启动子区转录调控区的初步鉴定 赵荣雪，张扬，李秀，徐琪，黄正洋，陈国宏 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州 225009) 引言 Factor)由P／卜，基因编码，是动物垂体前叶特异表达的一 特异转录因子PIT-1(PituitarySpecificTranscription 种具有重要功能的转录因子。PIT-J与垂体中艘L基因、GH基因、巧Ⅳ书基因以及P，弘，自身的启动子结合，调控 这些基因的转录，通过调节这些基因的表达而对动物的生长、发育、繁殖和免疫等很多方面起着重要的作用。在小 鼠上。该基因的启动子区发现了CREs结合位点和自身调控的P，卜J结合位点，都具有调控其表达的作用，研究还 发现在P，卜J基因的启动子区找到了一段增强子序列，而关于家禽的PIT-I基因表达调控尚未见有报道。本研究 通过对鹅PIT-I基因启动区的克隆和启动子活性分析为进一步研究其转录调控机制以及探索高、低产鹅之间是否 存在转录差异奠定基础。 材料与方法 利用染色体步移技术克隆出的该基因的启动子区序列，经PCR扩增，TA克隆，把目的片段连接到荧光素酶报 告基因载体(PGL-Basic)，制备了一系列启动子缺失突变体(一1485，-lbp，一1293／一lbp，一1014，-lbp．-775／一lbp， -561／一l 2000(Invitro- bp．-353／-1bp，一206，-lbp)。经酶切和测序鉴定正确后。进行质粒大量抽提。用Lipofectamine lmciferaseAaaaySystempromega)启动子活性。 结果 粒转染GH3细胞，根据报告基因检测结果显示，本实验所克隆的P，卜，基因基因启动子区具有明显的启动子活 性。在所有片段中，各段与对照组相比都具有明显的启动活性。-206／一lbp，-353／-1bp，一56l，．1bP启动活性逐渐 升高，-561／-l bp，-775／-1bp，一lOl4／一lbp，一1293卜lbp，启动活性逐渐降低，而一56l，_lbp片段对报告基因的启动 活性最强．比阳性对照PGL-Promotor的活性还高，而一561／一l bp片段是一353／-lbp和一775／-lbp片段启动子活性 的2倍多。 讨论 P，卜J基因是动物垂体前叶特异表达的一种具有重要功能的转录因子，对其进行深入研究具有重要意义。本实 验通过对其启动子区进行分析，发现不同段均具有启动子活性。且一56l，-l bp片段得活性最强．可以初步推断此区 域可以作为该基因的核心启动子区，也可以认为该区域(一353／一lbp…561／lbp)含有调控基因表达的顺式作用元 件，通过在线转录因子结合位点预测，发现该区域存在多个上调该基因表达的关键转录因子结合位点。如SPFI、 CAC-binding 具体作用机制还不清楚。下一步我们还将运用点突变、凝胶阻滞以及染色质免疫共沉淀等方法对P，卜』基因转录 调控机制开展深入的研究。 关键词：鹅；PIT-，；启动子；转录词控 致谢：此课题受现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx--45—04)：江苏省属高校自然科学基础研究面上项目 (07KJB230138)和扬州大学科技创新培育基金项目(2010CXJ056)资助。