生物微球在免疫亲和质谱分析与应用.pdfVIP

生物微球在免疫亲和质谱分析中的应用 张贵锋1’ 高建萍2 冯静3 黄盂军3 刘琳2 苏志国1 (1中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京100190；2山东农业 大学食品科学粤工程学院，山东泰安，271018：3北京中医药大学中药学院，北京 100102) 质谱技术具有分析速度快、样品需求量少和准确度高等优点，电喷雾技术(ESI) 和基质辅助激光解析电离技术(MALDI)的出现使生物质谱技术逐渐成为生物犬分子研 究领域中必不可少的分析手段，在蛋白质或多肤序列分析、翻译后修饰分析、生物大分 子之问的相会作用以及疾病早期诊断中标志物的快速检测等中的应用日益广泛。在质谱 分析过程中，不同蛋白质或多肽的离子化效率存在差异且受样品基质影响，因此样品预 处理过程十分关键，尤其对于低丰度目标蛋白质或多肚等样品。近年来，基于免疫亲和 的样品前处理方法在生物样品质谱分析中的应用引起广泛关注，在免疫亲和质谱分析过 程中，琼脂耱凝胶、高分子聚合物微球、硅胶、磁性微球以及纳米金等币同微球或纳米 材科均可用于目标物富集、分离或浓缩，致使免疫亲和质谱法用于定性分析、定量检测 以及过程分析的优势日益突出。 ．．．… …”}I-”…5+LL} +lk ^Y声 ^Y户 丫一 ^卜 卜 莓I)_ 《——一_ q 一‘ (J o—I』lUJ山上 。!。一H址eLC-MS虬MS／MS 图1基于免疫亲和分离与MALDI—TOFMS及HPLC．MS分析的技术路线 在免疫亲和质谱分析过程中，抗体被固定在琼脂糖凝睦或硅胶等生物微球的表面， 用于从样品中特异性结合可以与抗体结合的目标蛋白质或多肽，洗涤去除未结合的杂蛋 抗体结合的蛋白或多肽．或将目标多肽或蛋自从微球表面解离后使用高教液相色谱质谱 联用技术(HPLC-MS)进行分析(图1)。 通*怍者张盎锋Tel：010Ematl：gfzh扎g@homeipe扯c日 基金Ⅲ目北京市自然科宇基金资助项目(Ⅲ目编号7102108) 两种质谱分析方法对生物微球的粒径、孔径范围及分布和基质等均存在不同要求。 在MALDI．TOFMS分析过程中，激光可以将与抗体结合的蛋白或多肽离子化，而与微 球以共价键结合的抗体仍保留在微球上；因此，微球的粒径和孔径分布应以蛋白或多肽 尽可能保留在微球表面为目标；在I-IPLC．MS分析过程中，与抗体结合的蛋白或多肽首 先被转移到溶液环境，经HPLC分离后进行在线质谱分析，样品预处理过程与层析分离 相似；因此，在样品预处理过程中，蛋白质或多肽是否进入微球孔道内部对目标物富集 效果存在一定影响，而对后续质谱分析过程没有影响。 论文重点针对免疫亲和质谱法中生物微球用于抗原．抗体结合部位识别、低丰度蛋 白质或多肽富集方法、蛋白或多肽样品定量分析以及疾病早期诊断过程中的标志物快速 检测等进行了综述，免疫亲和质谱分析法对生物微球的基质、粒径范围、孔径及分布的 不同要求进行了介绍，并对该技术定量检测等进行了评述。 【参考文献】 [1】万翠红黎根刘志强等．免疫亲和质谱法研究beta-2一微球蛋白抗原表位．化学学报， 576． 2008，66(13)：572—1 M H．An mass F，Neubert [2】Ocana immunoaffmityliquid forthe ofmatrix 9inmouseserum． spectrometryassay quantitationmetalloproteinase 1 10． Biochemistry,200，399：202—2