神经网络与加速随机搜索法优化虎杖中白藜芦醇的提取.pdfVIP

神经网络和加速随机搜索法优化虎杖中白藜芦醇的提取 刘韶1’2’3，李新中h2，朱周觐2，袁大林3，梁逸曾3(1中南大学湘雅医院药剂科，湖南， 长沙，4100084；2中南大学药学院，湖南，长沙，410083：3中南大学化学化工学院中药现 代化研究中心，湖南，长沙，410083) 摘要日的：研究酶解法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件。方法：以白藜芦醇的提取率为指标， 通过考察不同因素对提取率的影响规律，并在此幕础上运用均匀设计和化学计量学优化算法选出 优化的因素组合。结果：最佳提取工艺为：提取温度37．5℃，酶解pH值3．0，酶解时间7h，植物水 解酶的用量为30％(w／w)，与传统不加酶的提取工艺相比，酶处理后提取率提高了近5倍。结论： 酶处理后，可显著提高虎杖中自藜芦醇的得率。 关键词：虎杖；白藜芦醇；酶法；均匀设计 Sieb．etZucc．) 检测波长306rim，流速lml／min，柱温30℃，进样量 虎杖(Polygonumcuspidatum 系蓼科属多年生草本植物，具有祛风利湿、散瘀定 lOpL· 痛、止咳化痰的作用“’。白藜芦醇是主要活性成分 2．1．2对照品溶液配置精密称取白藜芦醇对照品 之一，它在虎杖中除了以游离的形式存在外，还以 3．Omg，置于lOmL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至 结合态的形式存在，即姐过B一葡萄糖苷键结合一 刻度，摇匀，得储备液。 个葡萄糖而形成苷，且苷的含量要远远大于苷元。 2．1．3标准曲线的制备精密量取白藜芦醇储备液 随着人们对白藜芦醇特殊生理活性认识和肯定，国 2mL、1．2mL、0．8mL、0．4mL、0．1mL至lOmL容量瓶 际市场上对白藜芦醇的需求不断增加，因此它成为 中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，得系列浓度 了多个科学近年来的研究对象‘2。。1。生物酶法越来越 多的应用于中药有效成分提取，它具有提取效率高， 的对照品溶液。按上述色谱条件，各取IOIJL进样测 不易造成有限资源的浪费和污染的特点，成为近 定，记录色潜峰面积的积分值，以白藜芦醇浓度 年来现代提取方法的研究热点盯。101。由于酶的种类， (pg／mL)横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标 酶解的温度、PH值、时问、酶的用量及各因素之间 准曲线。回归方程为Y=57．657x—i13．93。 的相互作用对酶解工艺有较大的影响，本研究采用 R2：O．9993，线性范围为3-60pg／mL。 试验次数少的均匀设计对其进行优化，并采用神经 2．1．4糟密度实验在上述色谱条件下取同一浓度 网络进行数据处理建立数学模型，加速随机搜索优 的白藜芦醇对照品溶液，连续进样5次，测定峰面 化算法选出优化的工艺参数。 积积分值，计算精密度。RSD为2．65％，表明进样精 1仪器与试药 密度良好。 虎杖粉末(湖南振兴中药饮片有限公司)批号： 2．1．5稳定性实验取同一样品溶液，分别在l，2， 纤维素酶(国药集团化学试剂有限公司)4，8，12hr测含量，结果样品在12hr内基本稳定， 批号：植物水解酶，植物提取酶由湖RSD为2．78％。 南尤特尔生化有限公司赠送。白藜芦醇对照品(中 2．1．6重复性实验精密称取同一批虎杖粉末5份， 国药品生物制品检定所，批号：1535—200001)，甲每份0．19，按照供试品制备方法和色谱条件进行测 醇(分析纯)，乙腈(色谱纯)，乙醇，蒸馏水， 定，RSD为3．96％。 磷酸，磷酸二氢钾(分析纯)。 2．1．7加样回收率精密称取己知白藜芦醇含量的 l 1A四元梯 Agilent100高效液相色谱仪，包括G131 虎杖粉末5份，每份0．059，精密加入白藜芦酵储备 液0．2mL，按供试品溶液制备的方法和色谱条件进 度泵、G1313A自动进样器、G13llA柱温箱、G1313A