现代生物技术在人参属药用植物研究与应用.pdfVIP

键糯 州鼬篇蒜罴裟篙裟篇嚣茹滁燃2012海峡两岸暨CSNR全国笼10居中药及天然药物资漫学术研讨会瞻·一秉 现代生物技术在人参属药用植物研究中的应用 Thenew used research technologiesfor，切即似genus 陈士林+，朱孝轩，陈晓辰，牛云云，张鑫，宋经元，罗红梅，孙超 (中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所／濒危药材繁育国家工程实验室，北京100193) 摘要本文综述了DNA条形码等分子鉴定技术、一代和二代测序技术、基因克隆等现代生物技术在人参属 药用植物的物种鉴定、转录组分析、次生代谢产物合成途径及关键酶功能鉴定等研究中的应用案例，表明现代生 物技术为人参属药用植物的分子水平研究提供保证，揭示了人参属药用植物转录组及功能基因等遗传信息，加速 了人参属药用植物基因组图谱绘制，为阐明人参属植物中重要次生代谢产物——人参皂苷合成的分子机制以及实 现体外合成重要天然产物及未来新药物的研发奠定基础。 关键词人参属药用植物；现代生物技术；DNA条形码；转录组：高通量测序；人参皂苷；次生代谢合成途 径：功能基因 五加科人参属(P口玎甜)包括多种药用植物，其中应用最广泛的有人参尸口玎似翻群sP馏、西洋参 J。人参皂苷、多糖、微量元素、氨基酸和多肽等是人参属 尸g甜砌g甜咖厅淞m和三七P即D^堰加sP馏lI 药用植物人参、西洋参和三七所含的主要化学成分怛J，其中以人参皂苷的药理活性最为重要，具重 大经济价值[31，对其进行的研究也最为广泛。人参皂苷属于萜类化合物中的三萜苷类，是一类重要 的植物次生代谢产物，也是人参属药用植物主要活性成分【4J，具多种结构、多种重要药理活性，包 括抗肿瘤、抗压抗疲劳、抗氧化、调节免疫力和保肝护肝掣5。引。人参皂苷生物体内合成机制的阐 明，是实现体外合成人参皂苷的前提，是未来新药物研发及生产的主要来源。 药用植物大多遗传背景不清、基因组信息缺乏、功能基因的研究较为薄弱一J，阻碍了重要次 生代谢产物合成途径的研究。为克服这一问题，越来越多的技术方法被用于药用植物分子水平的 研究中：如应用DNA条形码技术等分子鉴定方法和高效液相色谱等化学方法对人参属药用植物进 行品种鉴定、种质控制‘10111]；二代测序技术对人参属药用植物进行功能基因研究[1厶14]；基于BAc 库和高通量测序技术对人参基因组的探索及利用叶绿体基因组对人参属遗传关系的确立等【lxl6J。 本文主要对人参属药用植物品种鉴定、转录组分析、次生代谢产物合成途径及关键酶功能鉴定三 类研究中应用的现代生物技术加以综述。这些技术的应用，加速药用植物次生代谢途径机制的研 究，为实现药用植物次生代谢产物体外合成奠定了基础。 1 人参属药用植物分子鉴定 1．1 DNA条形码技术 1．1．1 DNA条形码技术及其优势 短序列来进行物种鉴定。陈士林等【18】在2010年正式提出ITS2作为药用植物鉴定的通用序列。DNA 条形码鉴定技术包括五大标准化流程：样品采集，DNA提取，PCR扩增，序列测定，序列拼接及 分析。该鉴定技术只需一个或少数几个基因片段，鉴定过程快速，有较高的稳定性和可重复性， 操作简单，数据便于信息化管理【l…。 1．1．2应用DNA条形码区分人参属药用植物 DNA条形码是直接利用DNA序列进行鉴定，具有独一无二的可重复性，且可通过设计通用 一33— ，删漆黪 键总 m攀黑筠篙黑裟燃罴蒸篓慧讨会蔼臻2012海皎两睾叠CSNR全冒第{O届中药及天然药物资源学术研讨会 引物的方法使流程标准化。Zuo等[10】收集了95份包含人参属所有物种的样品，比较了13条DNA 论述了ITS2作为植物条形码鉴定的优点，利用ITS2的保守性设计通用引物，扩增成功率高，可 以高效鉴别相近物种等。在双子叶植物中ITS2在种及属内的鉴定成功率分别76％及99％。同时利