致病性大肠杆菌O157∶H7基因分型的研究进展.pdfVIP

第四次猪病学术研讨会会议论文集 致病性大肠杆菌0157：H7基因分型研究进展 邵东华1’2邱亚峰10沈阳1史子学1马志永3≯ (中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241) 摘要大肠杆菌0157：H7是主要的食源性致病菌，产生的肠毒素能引起腹泻，出血性肠炎和溶血性尿毒综合症 (Hus)等。目前已为美国疾控中心列为食源性细菌感染风险首位。为更好地开展病原菌检测鉴定，分子流行病学 调查及病原溯源追踪，本文将大肠杆菌0157：H7基因分型方法归纳为三种：基于DNA的限制性分析，基于特异 靶标的PcR扩增和基于DNA序列多态性的确定。分型方法涉及的技术有：质粒分析．限制片段长度多态性．脉冲 场电泳、扩增性片断长度多态性分析和单核苷酸多态性分析等。 关键词 大肠杆菌0157：H7，基因分型，进展 食源性细菌感染引发的致病性和致死率，是世界性公共卫生问题。在荚国每年有超过五百万人 感染食源性细菌病，导致约46000名患者住院、1500人死亡，经济损失达几十亿美元…。产志贺毒 素的大肠杆菌0157：H7自1982年首次发现以来，在20多个国家相继发生了暴发和流行。该病多 发生于夏秋两季，儿章和老人为易感人群，常表现为腹泻、恶心、呕吐等症状，还町出现溶血性尿 毒综合症、血小板减少性紫癜等并发症，严重者危及生命。 表犁分犁技术主要通过菌体培养、生化特性和免疫反应等开展检测鉴定，具有简单直观的特点， 但表犁特征数量有限，易受环境等外界因素影响，分犁中还有一定的丰观性，因此结果不理想。大 肠杆菌0157：H7对人类健康的影响重大，开展流行病学调查以进行病原溯源追踪成为提高公众卫 生的重要手段。目前，研究较多的是基因分犁方法，可将患者携带菌与污染源病原菌直接联系起来。 本篇综述将大肠杆菌0157：H7基因分犁方法归纳为三类：基十菌体DNA的限制性分析、基十特 异靶标的PCR扩增和基于菌体基因组特定位点的DNA序列多态性的确定。进行分子流行病学调查 时，选择合适的分型方法需要考虑多方面凶素。不同的分型方法可能会获得小同的分型结果，应平 衡多参数的影响，还要联系到没备和人为等的作用。文中涉及的技术包括质粒分析、限制片段长度 多态性、脉冲场电泳、扩增性片断长度多态性、基于PCR分型、多种重复序列分析、多位点序列 分型和单核苷酸多态性分析。 l methods) 基于限制性的方法(Restriction-based 1．1质粒(plasmid)分型 质粒分型是早期片j于食源性病原体流行病研究的方法之一。质粒为细胞内能自我复制的环状双 链DNA分子，稳定独立存在于细菌染色体外。许多质粒还具有选择优势，能携带编码抗生素抗性、 重金属耐受性和毒性的基冈到宿丰细胞中。细胞分裂时质粒传递到子代，因此同一克隆株也就携带 了同种质粒，通过分析质粒可比较不同菌株。质粒分析方法已经，“泛应用。Kado和Liul2j通过碱裂 解和高温法使染色体DNA变性来提取质粒DNA。质粒分析的主要问题是质粒构象的变化(线性或 超螺旋)可能影响质粒电泳的迁移特性。同一质粒构象不同，电泳条带会不同；同一菌株含有多种 相近分子量的质粒，会因共迁移形成同一条带。为解决构象变化或共迁移现象，分离到的质粒混合 物可以通过限制性内切酶如HindIll的作用，生成限制图谱用于质粒分型。 质粒分型方法的局限在于某些菌株没有质粒，因此无法对该菌株做质粒分型。在有选择压力的 情况时，菌株的融合会使口，独立移动的质粒获得或丢失，也不利于菌株遗传相关性的分析。大肠杆 菌0157：H7的质粒分型和质粒限制性分析应用非常广泛。JollIlson瓜等IjJ为证明养殖场动物大肠杆 菌0157：H7的抗生素耐药质粒可以转移到人类，分离了共计931个人源和动物源菌株。结果表明， 许多有抗药性的人所排泄的菌株或来源于动物，而有抗药性的动物源分离株可能来源于其他的易感 动物。 邵东华(1978一12)，研究实习员，黑龙江省阿城人。Email：shaodonghm@sh试．ac．cn 4通讯作者，Enlail：zhiyongma@sh谢．ac．cn 8l 综述部分 1．2 限制性片段长度多态