柱切换HPLC法测定人血浆中布洛芬-对映体浓度方法的研究.pdfVIP

柱切换HPLO法测定人血浆中布洛芬·对映体浓度方法研究 梁茂植，余勤， 向瑾， 秦永平，南峰 l引 言 当药物分子结构中与碳原子相连接的4个原子或基团互不相同时，该药物称为手性 药物。由于自然界中的生命存在于由生物大分予组成的手性环境中，酶和受体系统总 是显示出对映体选择性或立体选择性，因而手性药物各对映体的药动学和药效学可能 存在很大的差异。建立快速、准确、灵敏的对映体拆分方法为评价手性药物各对映体 的生物活性提供了关键的技术手段。对映体化合物之间除了对偏振的偏转方向不同外， 具有完全相同的物理和化学性质，拆分具有相当难度；在生物样品中，手性药物及其 代谢物的含量极微，且易受到大量内源性成分的干扰，难度更大‘卜21。 布洛芬(Ibuprofen，mu)是一类应用广泛的非甾体解热镇痛药，其左右旋体在体内 的药理活性、代谢过程存在显著的差异【3～l，目前国内主要以其消旋体销售。目前测定 布洛芬对映体血药浓度的方法主要有：高效液相色谱；法(HPLC)19-”】，毛细管电泳法(CE) 未见使用OJ．H手性柱分离测定人血浆中布洛芬对映体的相关报道。本文建立了柱切换 HPLC法测定人血浆中布洛芬对映体的方法，本方法特异性好，灵敏度高，准确度好， 同时可有效保护手性柱，可用于布洛芬对映体药动学研究。 2实验部分 2．1仪器与试剂 Class 阀)， VP6．12色谱数据工作站。 50953 公司提供，含量分别为99．6％和100．0％(w／w)，批号分别为：SKF 内标对溴苯甲酸对照品由四川大学华西药学院提供。实验中所用试剂试药除正己烷、 异丙醇、三氟乙酸和甲醇为色谱纯外，其余均为分析纯。 2．2储备液配制 精密称取布洛芬对照品10 mL棕色容 mg、(s)．(+)-布洛芬对照品5mg，各置于10 ‘作名’：四川人学华西医院GCP中心临床药理研究室 87 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得布洛芬储备液(1 mg·mLd)和(s)一(+)．布洛芬储 备液(0．5 mg·mL‘1)，储存于-30C冰箱备用。临用时分别用色谱纯甲醇稀释成布洛芬消 旋体标准系列工作液和(s)．(+)-布洛芬标准系列工作液。 精密称取对溴苯甲酸5 mL容量瓶，即得内标储备液 mg，用甲醇溶解并定容于25 (0。2mg·mL’1)，储存于-30℃冰箱备用。临用时用色谱纯甲醇稀释成内标工作液 (4．0mg’L“)。 2．3色谱条件 手性柱为ChiralcelOJoH柱；非手性柱为UltimateTMSiO柱；手性柱前接预柱 (Phenomenex，4×3ram)。分析流动相为正己烷／异_内醇／三氟醋酸：预处理流动相为正己 烷／异丙醇，流速为1 动相正冲流出组分进入手性柱；紫外检测波长：230nill；柱温室温。 2．4样品预处理 取布洛芬消旋体标准曲线或(s)-(+)-布洛芬标准曲线样品0．2mL，加入对溴苯甲酸 内标工作液o．05mL，漩涡混匀，再加入o．2mL醋酸钠溶液，漩涡混匀后加入3mL正 己烷一异丙醇萃取液，漩涡萃取7min，离心7min，转移上层有机相于另一尖底玻璃 试管中，置50℃水浴中通空气流挥干，残留物溶于0．1mL分析流动相，漩涡混匀1rain， 分装入全自动进样器，进样0．04 mL，进行定量分析，分别测定布洛芬消旋体和(s)．(+)． 算。 3 结果与讨论 3．1柱切换方法的选择 实验中发现，在OJ-H手性柱上，以正己烷／异丙醇／三氟醋酸为流动相，柱温为室 温时，血浆样品经预处理后进样，在艰)．(一)．布洛芬色谱峰处有一杂质干扰。通过改变 样品预处理条件，改变流动相中异丙醇的比例、三氟醋酸的比例、烷烃、醇类置换剂 和有机改性剂的种类，改变柱温均不能将㈣．(．)．布洛芬与该杂质基线分离；同时尝试 在手性柱前串联非