中华鳖肠道益生菌的筛选、鉴定与生长特性研究.pdfVIP

第39卷 第2期 水 生 生 物 学 报 VO1．39．NO．2 2015年 3月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA M ar．． 2015 doi：10．7541／2015．39 中华鳖肠道益生菌的筛选、鉴定与生长特性研究 张 棋 吴志新 李 景 胡 明 石 焱 任雨薇 陈孝煊 (华中农业大学水产学院，农业部淡水生物繁育重点实验室，淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，武汉 430070) 摘要：通过点种法初筛和牛津杯法复筛，从 中华鳖肠道筛选到 1株对嗜水气单胞菌 eromonashydrophila)、 温和气单胞菌(．sobria)以及豚鼠气单胞菌 ．caviae)具有拈抗作用的益生菌株Dec．43。对该菌株进行形态、 生理生化特征分析，结果与 《常见细菌系统鉴定手册》中屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的生理生化特征一 致 。提取细菌基因组 DNA，通过 16SrRNA基 因通用引物进行 PCR扩增，从该菌株的 16SrRNA基因中克隆 到了一个长度 1448bp的片段，经测序和序列比对，该片段与 Genbank中屎肠球菌的序列相似性达99％，因 此，该菌株确定为屎肠球菌。通过单因素试验确定了该菌株的最佳生长温度、盐度、初始 pH、接种量等参 数分别为：36~C、盐度0．6％、培养基初始pH7、接种量 10％；通过正交试验，确定了该菌株培养基中碳源(葡 萄糖)、氮源(蛋 白胨)最适含量分别为 15和 10g／L。研究发现了一株中华鳖肠道潜在益生菌，并研究了其生 长特性，为 中华鳖养殖行业益生菌的应用提供了基础 。 关键词：中华鳖肠道；益生菌；拮抗作用；屎肠球菌；生长特性 中图分类号：Q939．1 文献标识码：A 文章编号：1000．3207(2015)02．0294．07 中华鳖 (Trionyxsinensis)是我 国重要的水产养 中华鳖益生菌主要为芽孢杆菌，如枯草芽孢杆菌[6]。本 殖品种，在我国水产养殖行业 占据着重要地位 。但 项研究从中华鳖肠道菌群中分离到一株对嗜水气单 是 ，在 中华 鳖 的养殖 过程 中，嗜水气 单胞 菌 胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌具有拮抗作用 eromonashydrophila)、温和气单胞菌 ．sobria)以 的益生菌，并对其生长特性和培养条件等进行研究， 及豚鼠气单胞菌 ．caviae)等病原菌可引起多种疾 为中华鳖益生菌的研究与开发奠定基础 。 病_】一]，造成巨大的经济损失。目前，对于中华鳖细 1 材料与方法 菌性疾病防治主要依赖抗生素等药物，但随着抗生 素的大量使用，也带来 了越来越多的问题：如病原 1．1 实验动物 菌的抗药性、养殖水体的菌群失调，以及药物残留 健康 的中华鳖，购 自江西金龟王实业有限责任 问题L5J。益生菌能有效提高宿主生长性能、消化能 公司，用于筛选益生菌。 力 6]『，增加宿主特定生长率，抑制病原细菌的生长， 实验菌株 嗜水气单胞菌 CCAM050021菌 提高饲料利用率[1。益生菌通过促进宿主血清溶菌 株 、温和气单胞菌 CCAM050055菌株，由本实验室 酶活性 、补体旁路活性 以及头肾吞噬细胞的吞噬活 保存；豚鼠气单胞菌 由福建省农科院提供。 性和呼吸暴发活性，能显著提高宿主免疫力，使得 培养基 肉汤培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)： 宿主对病原菌的抗病能力显著提高[8]。同时益生菌 牛肉膏 5．0g／L、蛋 白胨 10．0g／L、NaCI5g／L、琼脂 也能有效降低水体硝酸盐、亚硝酸盐、氨氮含量，净 2％，pH 7．2— 7．4。 化水质，改善水产养殖动物生存环境[9】。目前报道的 实验试剂 细