种植年限对杭白芍根际细菌群落及芍药苷含量的影响.docVIP

种植年限对杭白芍根际细菌群落及芍药苷含量的影响 　　[摘要] 为探寻栽培年限对杭白芍根际细菌群落及芍药苷含量的影响，揭示根际土壤微生态与杭白芍品质的关系，收集了1～4年杭白芍的根及根际土壤，利用PCR-DGGE检测土壤菌群多样性；利用HPLC检测根中芍药苷含量。结果表明，种植杭白芍能明显降低土壤的酸性，并随着栽培年份增加pH酸性持续下降，到第4年时土壤pH、酶活均达到最高，而有机质含量则最低。变性凝胶梯度电泳检测1～4年的根际细菌多样性在3.38～3.61，多样性随栽培年限而上升，说明杭白芍的生长会促进土壤中的细菌多样性。测序结果表明，杭白芍土壤中的优势细菌为γ变形菌、α变形菌、放线菌、酸杆菌及厚壁菌等，其中，根际特异菌主要为α变形菌、酸杆菌Gp1及放线菌；而在非根际土中γ变形菌为特异优势菌群。此外，1～4年的杭白芍根际优势细菌组成基本相似，只有少数种类随年份发生改变，表明根际细菌群落的组成主要受杭白芍物种的影响。HPLC检测结果表明，1～4年杭白芍的芍药苷质量分数分别为3.26%，3.30%，3.36%，3.41%，均超过国家标准，且随生长年份呈上升态势，但无显著性差异。相关性分析可知，芍药苷含量与土壤pH、细菌多样性呈显著正相关，与有机质呈显著负相关。与其他有连作障碍的作物不同的是，随着栽培年限的延长，杭白芍根际的pH和细菌多样性不降反升，但优势菌群变化不大，这可能是该植物不产生连作障碍的原因之一。研究表明，农业实践中之所以选择4年采收杭白芍根入药的原因之一主要是产量而不是有效成分含量。此外，研究还发现有效成分芍药苷的累积与土壤pH、有机质和细菌多样性关系密切，证明杭白芍的道地性与土壤微生态环境密切相关。 　　[关键词] 杭白芍；根际；变性凝胶梯度电泳；微生物多样性；高效液相色谱；芍药苷 　　[收稿日期] 2013-12-13 　　[基金项目] 中国博士后科学基金项目（2013M531484）；浙江省博士后科研项目（BSH1301033）；浙江省高校中青年学科带头人学术攀登项目（pd2013215） 　　[通信作者] 袁小凤，博士，副教授，主要研究方向为药用植物学，Tel：（0571E-mail163.com 　　白芍为毛茛科芍药属植物芍药Paeonia lactiflora的干燥根，在中国有悠久的栽培历史，驰名中外，其根并入药，能养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳。临床用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，肋痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。主产浙江、安徽、四川等地。此外，山东、贵州、湖南、湖北、甘肃、陕西、河南、云南等地亦产。浙江产杭白芍的品质最佳，居全国芍药之首，是著名的道地药材“浙八味”之一。杭白芍为多年生草本，其生长周期4～6年，生产实践中以4年收获白芍根最为常见，药典规定白芍饮片含芍药苷（C23H28011）不得少于1.2%[1]。目前，在我国耕地面积降低以及后备耕地资源不足的情况下，为提高耕地利用率，有必要研究1～4年的杭白芍其药效成分的累积动态及中药品质，了解生长年限对杭白芍品质的影响，探索采收种植4年杭白芍的合理性。 　　研究表明，道地药材是一个与生态环境、遗传密切相关的开放的复杂系统[2]。道地药材的道地性与产地的气候、土壤理化条件等环境生态方面关系密切[3]。其中，土壤微生物是土壤生态系统的核心，它们直接或间接参与了土壤中几乎所有的物理、化学和生物学反应，对土壤肥力及植物生长代谢非常重要，对道地药材内在成分的质量影响最大[4]。目前有关杭白芍的研究主要集中在药效、栽培和加工等方面，对于白芍的土壤微生物等关注不多，而了解其微生态环境对杭白芍生长的作用，以及杭白芍的生长年限反过来对微生态环境的影响，有助于阐明杭白芍道地性形成的微生态作用机制。因此，作者栽培并收集了1～4年杭白芍的根，同时收集其根际土壤，利用HPLC检测根中芍药苷含量，利用PCR-DGGE检测土壤菌群多样性，分析杭白芍根际土壤微生态与杭白芍品质的关系，为探索中药道地性与环境生态的相关性提供理论支持。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验设计和样品采集 野外栽培实验设在规范栽培基地磐安，实验分4组：2011年栽培的杭白芍（一年生）；2010年栽培的杭白芍（二年生）；2009年栽培的杭白芍（三年生）；2008年栽培的杭白芍（四年生）。实验地设在同一块地，土壤类型完全相同，每一组1 m×5 m，相邻而种，整个实验过程设专人管理。2011年的7月12日晴天下午14：00左右采样，用五点取样法分别采集一至四年生杭白芍根及其根际土壤[5]。采样时，刨去表层土壤，将白芍整个植株挖出，轻轻抖掉根系上的大块土壤，收集仍旧黏附于根部的土壤颗粒，每组大概随机采集10株左右，所收集的土壤混匀，过20目筛