丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞转染TGF-β1启动子活性的影响.pdfVIP

～乏夕第21次中华中医药学会肾病分会学术会议论文汇编 会导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化的加重‘6-71。可能与VEGF具有促进血管内皮细胞增殖及血 管形成，还能拮抗TGF--13的一些致纤维化作用有关¨1。 在本研究中，模型组慢性肾功衰残肾组织VEGF表达较正常组远远降低，经代文、保肾康和 TLBS复方治疗后，VEGF表达有不同程度的增高。与其他学者研究结果相符。可以推断调控VEGF 表达增高，有助于防止肾纤维化，延缓慢性肾功衰的进展。代表ECM合成的I型胶原积聚增加， 经过治疗后，其表达均有不同程度的下降。可以推断，“通络保肾复方”有类似于血管紧张素II受体 拮抗剂缬沙坦的作用，如增加VEGF在残。肾组织中的表达，抑制I型胶原积聚的作用等，从而达到 防止肾纤维化，早期保护残肾功能的作用。这为临床推广该复方制剂提供了理论基础。其进一步作 用机制尚待研究。 丹参酮IIA对大鼠肾小球系膜细胞转染TGF．131启动子活性的影响 秦荚1A杨君2于海2张冬梅1牛福玲1王硬仁1朱陵群1周春华2 1．北京中医药大学东直门医院肾病内分泌科 北京中医药大学东直门医院教育部中医内科重点 学科实验窒2．中国人民解放军海军总医院肾内科 肾脏纤维化是许多慢性肾脏疾病进展的最终结果，大量的实验证实TGF．131在肾脏纤维化的发 生、发展中具有重要的作用，我们的前期研究也表明(1)，TGF．131基因启动子的激活在肾小球成纤 维细胞增殖中起着重要的作用。活血化瘀中药丹参具有一定的预防与逆转。肾脏纤维化的作用旺’，丹 参酮IIA(tanshinoneIIA，TSN)是丹参重要的生物活性成分之一，我们的前期研究表明。’，丹参酮 IIA具有拮抗心肌成纤维细胞增殖，抑制心肌成纤维细胞al(I)胶原基因启动子活性的作用，但 是丹参酮IIA对于TGF．131转录是否有影响国内未见报道，本研究拟从基因转录水平探讨丹参酮IIA 对TGF．B1表达的影响。 1材醐叻法 1．1试剂和仪器丹参酮IIA(TSN，中国药品生物制品鉴定所)，大鼠系膜细胞(由第二军医大 ELISA 检测试剂盒(Roche)，酶标仪(ClinicBio)。 重组体的构建过程参见文献[4]。 1．3丹参酮HA影响大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用传代培养的细胞经胰蛋白酶消化、显微 镜下计数后，调整细胞密度为5x105／ml，每孔100pl接种于96孔细胞培养板中，培养过夜后弃去 培养基，换含有不同浓度丹参酮IIA的无血清新鲜培养基。丹参酮IIA采用DMSO助溶，取5mg丹 参酮II^，溶于5ml二甲亚砜，用2％FBSDMEM培养基将其配成终浓度分别为lxl0七g／L(丹参酮 x 阴性对照组：终浓度分别为l 10。39／L(对照低浓度组)、5x10’39／L(对照低浓度组)和10×10。g／L(对照 低浓度组)三个浓度组。每一浓度组重复12孔。培养24小时后每孔加入151al MTT，4h后加入150I_tl DMSO，振荡10分钟后在550rim波长下测定各孔的OD值。 飞≤y第21次中华中医药学会肾病分会学术会议论文汇编 1．4丹参甯ⅡA影响TGF．pl启动子活性的作用传代培养的大鼠肾小球系膜细胞经胰蛋白酶 消化、显微镜下计数后，调整细胞密度为lxl05／ml，每孔2ml接种于6孔细胞培养板中，待细胞 pSVp．gal作为内对照，以保持在转染效率相同的条件下比较CAT表达量。转染2嵋的CAT阳性表 Vector为阴性对照。转染24h后加入不同浓度的丹 达质粒作为阳性对照，2嵋的pCAT3．enhancer 10xlff39／L的三个浓度组，分别进行干预，24h后收集细胞。 终止培养的细胞用预冷的PBS洗涤3遍后，以裂解缓冲液裂解细胞，紫外分光光度计进行蛋 白定量。 1001．tl细胞裂解液加入100ILll13-gal 2xbuffer混匀，置37℃12小时后加入lM碳酸钠混匀， assay 酶标仪420nm测定光密度。