利用感染性克隆与体外突变技术研究刺突蛋白在SARS病毒致病机制中的作用.pdfVIP

第九届全军流行病学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集 几种虫媒病毒悬浮芯片检测方法的建立 罗渊杨保安刘伯华祝庆余 军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 【摘要】 虫媒病毒在我国分布广泛，有些病毒可造成严重的公共卫生问题，对于这类病毒快速甄别目 前缺乏高通量、快速的检测方法。悬浮芯片是近年来兴起的一种检测技术，具有高通量、操作简 便、重复性好、灵敏度高以及线性范围宽等优点，特别适合于多病原体的高通量检测及鉴定。因 此，开发高通量、快速检测多种重要虫媒病毒的悬浮：卷片技术在我国具有很好的应用价值和前景。 本研究通过在GeneBank上收集登革病毒、乙型脑炎病毒和森林脑炎病毒的核苷酸序列，利 Premier软件在保守区 用DNhMhN软件比对和分析，找出各病毒基因组的保守区域，借助Primer 内设计种特异性引物和探针；建立上述病毒的多重RT_PcR扩增方法，并对反应条件进行优化： 将探针分别共价交联到不同色标微球上，最后与PCR产物进行杂交，显色反应后利用Luminex200 进行检测分析。初步结果显示，将平均荧光强度的判断阈值(cutoff)定为背景值的四倍可以 对各病毒进行有效鉴别。通过多批次的实验，表明三利-病毒的检测探针能准确鉴别出相应病毒种 类，没有交叉反应出现，并且批次问的平均荧光值偏离不大，这就进一步验证了所建赢的检测方 法有着很好的特异性和重复性。 利用感染性克隆与体外突变技术研究刺突蛋白在SARS病毒致病机制中的作用 韩剑峰陈水平姜涛秦成峰邓永强于曼秦鄂德 军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 【摘要】 SARS病毒是已知RNA病毒中基因组最大的一类病毒，目前对其结构功能与致病机理等了解 尚少，反向遗传学及体外突变技术为深入开展该领域研究提供了技术于段。刺突蛋白参与SARS 病毒与细胞受体结合及膜融合入侵过程，决定着病毒的感染特性，与其致病机制具有密切关系。 本研究首先构建SARS病毒BJ01株全长cDNA克隆，在生物信息学分析的基础上对刺突蛋白受体 结合I又：的感染性相关位点及七肽重复区进行突变体构建，比较突变病毒感染特性与野毒的差异。 实验结果表明刺突蛋白受体结合位点突变病毒对敏感细胞的感染性与野毒株相比显著降低。七肽 重复|又：突变病毒则完全丧火感染能力，表明该区为病毒关键功能域。以上研究初步揭示SARS病 毒刺突蛋白受体结合位点及七肽重复区在病毒感染性方面的重要作用，这一结果为深入阐明 SARS病毒的致病机制及设计新型抗病毒策略提供了理论依据，为_丌发嵌合疫苗、减毒疫苗以及 构建新型病毒载体奠定了基础。