超表达线粒体融合蛋白2基因（Mfn2）抑制小鼠卵母细胞体外成熟.pdf

募篡 孽 墩奠熊●糖哦豢簟 Onlinesystem：http：／／ww … ～· … 茹w．jaboitecho．rggy 淄 磐 超表达线粒体融合蛋白2基因 2)抑N4,鼠卵母细胞体外成熟 陈西锐 李建 李科瑛 许晓磊 雷安民 西北农林科技大学动物医学院／陕西省干细胞工程技术研究中心／陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌712100 +通讯作者，anminleiryan@nwsuaf．edu．cn 摘 要 线粒体融合蛋白2基因(mitofusin2，Mfn2)参与细胞凋亡和细胞周期调控，在卵母细胞和胎盘发育 中起着重要作用。本研究旨在探讨Mfn2基因对小鼠( musculus)~"母细胞体外成熟过程的影响。从小 鼠卵巢中克隆Mfn2基因并构建pMfn2．Venus真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pMfn2一Venus转 染293T细胞(病毒包装细胞)，确认重组质粒在293T细胞 内的表达及定位。将pMfn2一Venus体外转录为 cRNA，并 注 射 入 小 鼠卵细 胞 中 ，进 行 体 外 成 熟培 养 ，并 统 计 卵 母 细 胞 生 发 泡 破 裂 fgerminalvesiclebreakdown，GVBD)发生率以及第一极体(firstpolarbody,PB1)排出率，荧光显微镜下观察其 表达及定位。结果显示，注射 了Mfn2一VenuscRNA的卵母细胞，其GVBD发生率以及PB1排 出率与对照组 相比显著降低 <0．0001，P<O．05)。本研究首次揭示了Mfn2基因对小鼠卵母细胞体外成熟过程的影响， 为卵母细胞体外成熟的研究提供了一个新方向，同时也为研究减数分裂过程中Mfn2基因提供了一个平台。 关键词 小鼠卵母细胞，线粒体融合蛋白2基因(Mfn2)，体外转录，显微注射 Over-expressionofMitofusin2Gene(Mfn2)HasEffectonMouse(Mus musculus)Oocytes／nvitroMaturation CHEN Xi—Rui LIJian LIKe—Ying XU Xiao—Lei LEIAn—Min CollegeofVeterinaryMedicine，ShaanxiStem CellEngineeringandTechnologyResearch Center,ShaanxiKeyLaboratory ofMoleculra BiologyforAgriculture，NorthwestAgriculturalandForestry University,Yangling712100，China Correspondingauthor,anminle an@nwsua~edu．cn Abstract Mitofusin2(Mfn2)participatesinapoptosisandcellcycleregulation，whichalsohasanimportant roleinoocyteandembryodevelopment．InordertodetermineMfn2geneeffectonmouse(Musmusculus) oocytesduringinvitromaturation(IVM)inthepresentstudy,firstly,theMfn2genewasclonedfrommouse ovary byRT-PCR，andaneukaryoticexpressionvectorpMfn2一Ven