激活视网膜水平细胞NMDA受体对GABA转运体的抑制.pdfVIP

第 16卷第6期 重庆科技学院学报(自然科学版) 2014年 l2月 激活视 网膜水平细胞 NMDA受体对 GABA转运体的抑制 姜晓东 周桂凤 汪耀珠 (湖南师范大学医学院，长沙 410013) 摘 要：目的：在视网膜水平细胞上研究激活NMDA受体对 GABA转运体的调节作用。方法：采用膜片钳全细胞记 录，分析水平细胞NMDA受体在激活前后的GABA转运体电流变化，并分析 ca“在其中的作用。结果：当灌流0．1 mmol／L的NMDA30s后，1mmol／LGABA所引发的GABA转运体 电流下降到 了对照水平的 (78．01±3．10)％ (n=5)；当细胞外 Ringer’S液的ca 被去除后 ，NMDA的抑制效应消失；当胞内ca 库的ca“释放和重吸收被阻 断，或者胞内ca。被BAPTA缓冲后，NMDA的抑制效应减弱。结论：激活视网膜水平细胞的NMDA受体会抑制 GA- BA转运体电流，细胞内ca“参与调节过程。 关键词：视网膜；NMDA受体；GABA转运体 ；Ca“ 中图分类号：Q436 文献标识码 ：A 文章编号：1673—1980(2014)06—0160—05 水平细胞是视网膜外网状层的中间神经元，是 15～20cm)视网膜酶解方法得到。。。取视网膜置 光感受器细胞的突触后神经元。水平细胞反馈调节 于含酶Hank’S液 (20U／mL木瓜蛋白酶，1g／L半胱 光感受器细胞 (视锥细胞和视杆细胞)的神经递质 氨酸)中，在室温静置 20min后，再用Hank’S液反 谷氨酸的释放，并参与下级神经元包括双极细胞和 复冲洗，中止消化过程，保存于4℃条件下。在膜片 神经节细胞光感受野的形成。 一氨基丁酸 (GA． 钳记录前，取视网膜置于无镁 Ringer’S液 内剪碎 ， BA)是亮度型水平细胞的神经递质，水平细胞上的 并用 口径由大至小的不同滴管，反复轻柔吹打，至溶 GABA转运体负责GABA的释放和重吸收 。 液浑浊后，静置 3min，去上清液即可。亮度型水平 N一甲基 一D一天冬氨酸 (NMDA)受体，作为谷 细胞可以根据形态去分辨 。 氨酸受体的重要亚型，广泛分布于中枢神经系统，参 1．2 全细胞记录和给药 与神经元的兴奋性活动过程。NMDA受体对 ca¨ 选用水平拉制仪 (P87，SutterInstrumentInc．， 通透，进而通过下游信号通路对多种离子通道和受 USA)加热拉制芯硼硅酸盐玻璃胚 (SutterInsturment 体有调节作用 J。视网膜水平细胞上的谷氨酸受体 Inc．，USA)制备电极，电极插入水中，电阻控制在 中，研究较多的是AMPA亚型受体；NMDA受体发现 5—8Mlq。电极内灌注电极内液，与膜片钳放大器 较晚，其功能尚不明确。水平细胞上AMPA受体对 (Axopatch200B，AxonInstrumentInc．，USA)相连， GABA转运体有调节作用，激活NMDA受体是否可 并安装在微动操作仪(MCIO00e，SDInsturmentInc．， 以调节 GABA转运体还有待研究 J。 USA)上。参考 电极采用 Ag／AgC1电极，并用 argar／ 因此，本文在分离的鲫鱼视网膜水平细胞上，利 NaC1盐桥与细胞培养皿溶液相联。显微镜下移动电 用膜片钳全细胞记录，分析激活NMDA受体对 GA． 极与细胞形成 Gn封接后，再吸破胞膜形成全细胞记 BA转运体电流的影响，研究 Ca 及胞 内Ca 库在 录模式。调整补偿快速电容、细胞 电容、串联阻抗，并 其 中的作用。 启动低通滤波后，设定钳制电压一60mV，开始全细胞