木质层孔菌原生质体的制备与再生条件的研究.pdfVIP

2008芷 18(5) 生 物 技 术 41 木质层孑L菌原生质体的制备与再生条件的研究 崔艳红，张海棠，王艳荣，韩庆功，熊严严 (河南科技学院动物科学学院，河南 新乡453003) 摘要：目的：提高木质层孔菌原生质体的产量和再生率 ，为进一步诱变育种提高菌株产木质纤维素酶活力打下基础。方法： 通过单因素实验分别筛选合适的酶浓度、菌丝的菌龄、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂与pH值。结果：在酶解液浓度为2．0％ 纤维素酶+2．O％蜗牛酶、菌龄60h、酶解温度32℃、酶解时间3h，以0．8mol／L的NaC1溶液为渗透压稳定剂 ，pH值为5．0时，原生 质体形成量达4．13×1 个／mL，再生率可达6．95％。有效地提高了木质层孔菌原生质体的产量和再生率。 关键词：木质层孔菌；原生质体；制备；再生 中图分类号：Q939 文献标识码 ：A 文章编号：1004—311X(~08)05—0041一o3 StudiesonFormafionandRegenerationoftheProtoplast from Fomeslignosns(Brek)Ccoke CIUYah—hong，ZHANGHai—tang，WANGYan—rang，HANQing—gong，XIONGYan—yah (CollegeofAnimalScienceofHenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China) Abstract：Objective：RaisingtheoutputandtheregenerationrateofprotoplastfromFomeslignasns(Brek)Ccokwhichactsasabaseofmutation breedingimprovinglignocelluloseproduction．M ethod：Suitableenzymeconcentration，filamentousage，enzymolysistemperatureandtime，stabi- lizingagentofosmoticpressureandpH valuewerescreenedbyamolto—factorexperiment．Result：Whentheconcentrationof ceUuloseand dusulasewas2．0％，ageofthestrainupto60h，enzymolysistemperaturewaft32~Candtimewas3h，Nailsolutionwas0．8mol／L，nadpHval- uewas5．0，theoutputofprotoplaslsreachde 4．13×1 ，lllLandtherateofregenerationachievde 6．95％ ．Inaword，theoutputandtheregen． erafionrateofprotoplastfromFomeslignosns(Brek)Cookincreased． Keywords：Fomesli~ ns(Brek)Cook；protoplasts；formation；regeneration 如何开辟新的饲料来源，提高饲料利用率已是一个世界 1．1．4 培养基 性的研究课题…。秸杆作为一种特殊形态的可再生资源，因 1．1．4．1斜面保藏培养基：固体综合PDA培养基。 其含有难以降解的木质素，长期 以来一直没有得到合理的开 1．1．4．2 液态菌丝生长培养基：液体综合PDA培养基。 发利用。目前国内关于秸杆的降解多集中在纤维素的降解方 1．1．4．3 原生质体再生培养基：分别采用0．8moYL氯化钠、 面，对于木质素的研究 比较少，木质素的生物降解是真菌、细 0．6mol／Lg化钾、0．6mol／L硫酸镁、0．6mol／L甘露醇和0．6nml／L 菌和相关微生物群落共同作用的结果，