人源化抗体的研究进展.docVIP

抗体的研究进展 摘要： 单克隆抗体的问世使得人们对于一种新的治疗疾病的药物充满期待，然而鼠源性抗体往往会受到人体免疫系统的排斥，因而抗体的人源化已成为治疗性抗体的发展趋势。用人抗体取代鼠抗体，(genetically engineered antibodies ， GEAb)，， ，mRNA，逆转录成cDNA，再经PCR分别扩增出抗体的重链及轻链基因，按一定的方式将两者连接克隆到表达载体中，并在适当的宿主细胞(如大肠杆菌、CHO细胞、酵母细胞、植物细胞及昆虫细胞等)中表达并折叠成有功能的抗体分子，筛选出高表达细胞株，再用亲和层折等手段纯化抗体片段[1]。 1984年，Morrison等首次报道人鼠嵌合抗体在骨髓瘤成功表达，标志着基因工程抗体的诞生。1986年，Jones等人源化抗体构建和表达成功。1988年，Skerra等第一次证明抗体的Fab和Fv片段可以在大肠杆菌(E。coli)1989年，Huse等用外分泌型载体构建成功小鼠抗体库，利用抗体库技术获得了全人源化的抗体。1994年，德国基因工程抗体研究小组成功地将基因工程抗体在培养细胞中表达，抗体释放到组织培养液中，1982年，当Philip Karr将第一株抗独特型单抗(anti-1d)应用于B细胞淋巴瘤的临床治疗并取得成功之后[5]，治疗性抗体的研究很快成为生物医药的热点，许多以单克隆抗体为研究对象的公司相继成立。然而，随着单克隆抗体研究的广泛深入开展，大量临床实验结果背离了人们的期望。直到1994年，只有一株用于治疗急性移植排斥反应的单克隆抗体OKT3被FDA批准上市。此时，人们对于治疗性单抗研究的热情已经开始消退，Fc段不能有效地激活人体效应系统；，，，，80年代末期，，，PCR方法扩增抗体可变区基因、大肠杆菌表达功能性抗体片段以及噬菌体展示抗体功能片段等，，，，Fc段能够诱发机体的效应功能-募集效应因子或效应细胞，，20h，21d。对于该现象的解释是：Fc段可以特异结合人血管内皮细胞上的Fc受体(FcRn)，，FcRn结合而很快从循环系统中清除。 1988 年Riechmann 首次成功地构建了有活性的人源化抗体[6] ，Kabat 法查出大鼠YTH34。5HL 抗体CDRs 所在部位及序列，CDRs序列的寡聚核苷酸将其插到人抗体(New 和REI) 重链或轻链的V 区框架中，V 区结构域( HuV HCAMP) ，C区结构域相联：IgG2b 的C 区相联，H 链丢失突变的YTH34。5 杂交瘤细胞中，HuV HCAMP，HuV H2CAMP IgG2b 的活性，HuVHCAMP 活性降低；V 区分别与人抗体IgG1，23，C 区相译，H 链丢失的YTH34。5细胞，IgGl 相联的抗体有活性，IgGl 做为框架区；C 区结构域相联；Ig的同一鼠骨髓瘤细胞YO中，CAMPATH-l 抗原结合的抗体。 在构建人源化抗体时要特别注意两个问题：V 区做为框架区；(Complementarity determining regin， CDRs) ，CDRs 空间构型有影响的氨基酸残基，CDRs 一起插入到框架区中，V 区中也常出现特殊的氨基酸残基，V 区的保守序列，，，，，30%左右的鼠源序列，，(Human anti-mouse antibody， HAMA)，CDRs，，Roberto等认为抗体CDR 区中仅有部分与抗原相接触的氨基酸残基，，( Specificity-Determining Residues， SDRs) ， Roberto，CDRs区内这些必需的SDRs到人抗体框架区，COL-1，，CDRs或SDRs移植所构建的“嵌合”抗体与其亲本非人源单抗相比，，Fab段的轻、重链可变区具有6个抗原互补决定区(CDR) 。CDR1、CDR2 和CDR3之间有一个起结构稳定作用的框架区( FR) ，FR分隔而起支架作用，CDR平面可直接接触抗原，， FR CDR的支架，CDR 到人抗体骨架区( Framework region， FR) ，CDR 构象构建而成的人源化抗体。相对于亲本非人源抗体和嵌合抗体，9%来源于亲本非人源的单抗，，，，，FR区某些关键位点上保持原有的氨基酸残基对抗原互补决定区构象至关重要，FR。如果仅仅移植CDRs至人抗体FR而忽视这些关键位点上的氨基酸残基，， CDR，CDRs到人抗体FR上产生的改型抗体将丧失全部或大部分抗原亲和力，(通常该位点的氨基酸残基维持着高变区的构象)后才能保持改型抗体的抗原亲和力。所以，CDRs构象的框架区氨基酸残基位点就显得尤为重要，Foote and Winter定义了单抗框架区关键氨基酸位点的“游标”区(Vermier zone)，，，，，( Antibody resurfacing) 的应用 1991年