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生物质谱技术研究进展及其应用
谭生建,刘刚,姜韧,张华
(解放军第306医院药学部北京100101)
质谱分析已遍布各个学科的技术领域,在固体物理、冶金、电子、航天、原子能、地球和宇宙化学、
生物化学及生命科学等领域均有着广阔的应用。质谱技术在生命科学领域的应用,更为质谱的发展注入
了新的活力,形成了独特的生物质谱技术。
质谱法是将被测物质离子化,按离子的质荷比分离,测量各种离子谱峰的强度的一种分析方法,可
以进行定性分析(包括分子质量和相关结构信息)和定量分析(利用峰强度化合物含量相关)。
质谱仪一般由四部分组成:进样系统——按电离方式的需要,将样品送入离子源的适当部位:离子
源——用来使样品分子电离生成离子。并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束;质量分
析器——利用电磁场(包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等)的作用将来自离
子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置,时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离;检测器
——用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。一般情况下,进样系统将待测物在不破坏系统真空的
情况下导入离子源(i0曲~10一mmHg),离子化后由质量分析器分离再检测;计算机系统对仪器进行控制、
采集和处理数据,并可将质谱图与数据库中的谱图进行比较。
1进样系统和接口技术
将样品导入质谱仪可分为直接进样和通过接口两种方式实现。
1.I直接进样
在室温和常压下,气态或液态样品可通过一个可调喷口装置以中性流的形式导入离子源。吸附在固
体上或溶解在液体中的挥发性物质可通过顶空分析器进行富集,利用吸附柱捕集,再采用程序升温的方
式使之解吸,经毛细管导入质谱仪。
对于固体样品,常用进样杆直接导入。将样品置于进样杆顶部的小坩埚中,通过在离子源附近的真
空环境中加热的方式导入样品,或者可通过在离子化室中将样品从一可迅速加热的金属丝上解吸或者使
用激光辅助解吸的方式进行。这种方法可与电子轰击电离、化学电离以及场电离结合,适用于热稳定性
差或者难挥发物的分析。
目前质谱进样系统发展较快的是多种液相色谱/质谱联用的接口技术,用以将色谱流出物导入质谱,
经离子化后供质谱分析。主要技术包括各种喷雾技术(电喷雾,热喷雾和离子喷雾):传送装置(粒子
束)和粒子诱导解吸(快原子轰击)等。
1.2电喷雾接口
带有样品的色谱流动相通过一个带有数千伏高压的针尖喷口喷出,生成带电液滴,经干燥气除去溶
剂后,带电离子通过毛细管或者小孔直接进入质量分析器。传统的电喷雾接口只适用于流动相流速为l~
5IIi/min的体系,因此电喷雾接口主要适用于微柱液相色谱。同时由于离子可以带多电荷,使得高分子
物质的质荷比落入大多数四极杆或磁质量分析器的分析范围(质荷比小于4000),从而可分析分子量高
达几十万道尔顿(Da)的物质。
1.3热喷雾接口
存在于挥发性缓冲液流动相(如乙酸铵溶液)中的待测物,由细径管导入离子源,同时加热,溶剂
在细径管中除去,待测物进入气相。其中性分子可以通过与气相中的缓冲液离子(如NH4+)反应,以化
学电离的方式离子化,再被导入质量分析器。热喷雾接口适用的液体流量可达2ml/min。并适合于含有
大量水的流动相,可用于测定各种极性化合物。由于在溶剂挥发时需要利用较高温度加热,因此待测物
有可能受热分解。
1.4离子喷雾接口
384
在电喷雾接口基础上,利用气体辅助进行喷雾,可提高流动相流速达到lml/min。电喷雾和离子喷
雾技术中使用的流动相体系含有的缓冲液必须是挥发性的。
1.5粒子束接口
将色谱流出物转化为气溶胶,于脱溶剂室脱去溶剂,得到的中性待测物分子导入离子源,使用电子
轰击或者化学电离的方式将其离子化,获得的质谱为经典的电子轰击电离或者化学电离质谱图,其中前
者含有丰富的样品分子结构信息。但粒子束接口对样品的极性,热稳定性和分子质量有一定限制,最适
用于分子量在1000Da以下的有机小分子测定。
1.6解吸附技术
将微柱液相色谱与粒子诱导解吸技术(快原子轰击,液相二次粒子质谱)结合,一般使用的流速在
110111/min之间,流动相须加入微量难挥发液体(如甘油)。混合液体通过一根毛细管流到置于离子
源中的金属靶上,经溶剂挥发后形成的液膜被高能原子或者离子轰击而离子化。得到的
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