备用背根猫脊髓源性神经营养活性物质的初步分离及生物活性检测.pdfVIP

维普资讯 脊 )中号云 砖 怠 笸 爹i覆 f～岁 JfI竖进 杂志 1997年第5卷第 1期 上 乙 ’ 响。术后 5天取双测 TzSz脊髓背角组织，一 透析 、冻干 ，用再改 良的悬滴培养法进行生物 匀浆、离心后，取上清液进行 电泳分析，并与 活性检测 。结果发现 ：手术侧背角提取液 中第 鸡胚背根节 (DRG)联合培养 。结果显示 ：l- 二峰值洗脱液促鸡胚背根节神经突起生长 的 对聚丙烯酰胺梯度 电泳的电泳谱分析，发现 作 用 明显张于非手术侧者 (P0．O1)，在加 在相对迁移率 (RM)0．11带的蛋 白质，针剌 入量为 50yg／ml时，促神经突起生长作用最 侧吸收峰面积百分比(11．78士1．089，6)较非 强。本研究结果为进一步分离纯化该神经营 针剌 测 (10．12士0．83 )明显 增高 (P0． 养活性物质奠定了基础 05)。2．取 RMO．1l带及空 白凝胶小片分别 ，‘～ f检测插人质粒的 eDNA片断的一种方 与 DRG联合培养 ，48小时后测量 DRG神经 法 谌宏 鸣 吴 良芳 。保天然 华西医科大 突起 平均长度 。发现针 刺侧 (220．43士6． 学组织学研 究室 成都 610041 近年来原 01ym)、非针剌侧 (187．084-8．Ol~m)、以及 位杂交技术 日趋常用 。制备探针之前先将外 参照组 (155．77士2．04ym)之 间均存在明显 源 cDNA(目的基因)重组于质粒载体上 。重 差异 。以上结果提示，部分去传人猫背角组织 组时用一或二个限制性 内切酶将外源 eDNA 中存在某种促神经突起生长的神经营养活性 插入质粒载体 的多克隆位点上备用 。使用探 物质 ，针剌通过增加该活性物质的含量来加 针时进行质粒的转化 、扩增 、抽提并进行检测 强这种促神经突起生长效应 。由此推测 ，部分 以确保外源 eDNA 的存在 ，这是制备探针的 去传人和针刺 引起 的这类神经营养活性物质 关键性步骤 。最简单的检测方法是用重组时 的含量增加 ，可能与备用根猫在体 的侧支出 多克隆位 点的酶进行酶切后 ，电泳时应 出现 芽有关。 ( 二条带即质粒本身的DNA 片断带和外源 一 备用背根猫脊髓源性神经营养活性物质 eDNA 片段带 ，若 因温度或其它因素 的干扰 的初步分离及生物活性检测 刘 苏 吴 良 不 出现二条带时，提示可能是外源 eDNA 已 芳 天然 华西 医科大学组织学研 究室 丢失 ，仅 留下单一的质粒带 ，但是否真 的丢失 成都 610041 本研 究组对脊髓可塑性研 究 了呢?尚需检测。我们在 出现此情况时 ，考虑 已证 实 ，切除猫部分背根后 ，保 留的背根 (备 从 多克 隆酶 切位 点扩展 到质粒载体位 点上 用根)纤维可则侧支出芽代偿被切断的传人 去。采取了另寻质粒载体上台质的酶切位点 纤维，并与其靶区 (背角)重建突触联系。用 电 进行酶切后，再根据 电泳上每条带的位置及 泳和体外培养等方法亦发现备片j背根猫去传 载体本身的大小来分析外源 eDNA 是存在 入侧脊髓背角组织提取液中一些蛋 白质的含 或 已丢 失 。本 实 验 所 用 的 质 粒 载 体 是 量发生了变化 ，而且其促神经突起生长的作 pBluscriptsk一，sacI位 点紧连接于 T。噬菌 用增强 。在 以上研究的基础上 ，我们采用凝皎 体