大鼠NgR特异性siRNA慢病毒载体的构建与鉴定.pdfVIP

· 2 · SICHUANJOURNALOFANATOMYVOL 16 NO．4 2008 论著 大鼠NgR特异性 siRNA慢病毒载体的构建与鉴定 林如英 ，王玮 (1．福建医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系；2。福建医科大学神经生物学研究中心，福建 福州 350004) 【摘要】 目的 将 siRNA技术应用于NgR(Nogo受体)，构建出有效的NgR特异性siRNA慢病毒载体。方 法 按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求 ，设计、合成4对 siRNA，并将其与双酶切慢病毒载体 pGCSIL-GFP 连接，转化，挑取阳性克隆进行PCR鉴定，阳性克隆送测序。结果 4对 NgR特异性 siRNA与双酶切慢病毒载体 pGCSIL-GFP连接成功。结论 4对NgR特异性 siRNA慢病毒载体的构建成功，为进一步合成病毒载体及观察NgR 特异性RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达对脑 白质损伤的修复作用奠定了基础。 【关键词】 NgR；siRNA；脑白质；少突胶质细胞；脑损伤；慢病毒 【中图分类号】 Q75 【文献标识码】 A ConstructionandIdentificationofSpecificsiRNA RatNgR GeneLentivirusVector LJN Ru—ying，WANG Wei (1．DepartmentofAnatomy，HistologyandEmbryologyofFU JANMedicalUniversity； 2．ResearchCenterofNeurobiologyofFUJ1ANMedicalUniversityFujianFuzhou，350004) [Abstract] Objective ConstructionofeffectiveNgR (Nogoreceptor)specificsiRNA lentivirus vectorbytheapplicationofsiRNA technique．Method FourpairsofsiRNAsweredesignedand synthesizedbasedontheElbashirprincipleandsiRNA intrinsiccharacterandtheligationproducts ofthesiRNAswith doubledigested IentivirusvectorpGCSII，GFP weretransformed．Colonies werePCR screenedandpositivecloneswithputativein-frame1igationwerefurthersequenced．Re- sult TheligationoffourpairsofNgR specificsiRNAstothedoubledigestedLentivirusvector pGCSII，GFPwassuccessfu1．Conclusion ThesuccessfulconstructionoffourNgR specificsiRNA 1entivirusvectorsshedlightonothervirusvectorconstructionsaswel1asfurtherstudyoftherepair functionoftheNgR specificRNA interferenceonratbrainwhitematterdamagebyinhibitingNgR mRNA expression． [KeyWords] NgR；siRNA；Whitematter；Oligodendrocytes：Braindamage；Lentivirus 随着产科和新生儿重症监护治疗技术的发展，早 突胶质细胞髓磷脂相关蛋 白Ompg的受体，激活 产儿的存活率不断提高，早产儿脑损伤问题成为围产 Nogc~A的同时也激活了这两种蛋 白，从而使