大鼠心室肌RNA提取的最适取样量研究.pdfVIP

· 22 · SICHUANJOURNALOFANATOMYVOL 17 NO．3 2099 · 短篇报道 · 大鼠心室肌 RNA提取的最适取样量研究 周立，王志勇，郭义威，孙永琨 (新乡医学院人体解吾4学教研室，河南新 乡 453003) 【摘要】 目的 探讨lmLTrizol试剂提取大鼠心室肌高质量RNA的最适取样量。方法 分别用 1mLTrizol 提取8O，60，4O，20nag大鼠心室肌总RNA。结果 心室肌取样量小于40nag时，提取的RNA完整性和纯度可满足后 续实验要求。 【关键词】 RNA；提取；心室肌；大鼠 【中图分类号1 R725．4 【文献标识码】 A TheInvestigationofOptimalSampleQuantityinIsolationofRNAfrom RatLeftVentricularMuscle ZHOULi，WANGZhi—yong，GUOYi—wei，SUN Yong—kun (DepartmentofAnatomy，XinxiangMedicalCollege，HenanXinxiang453003) [Abstract] Objective Toinvestigatetheoptimalsamplequailtyinextractionofhigh-qualityRNA from ratleftventricularmuscle．Method Use1mLTrizolreagenttoextracttotalRNA from 80， 60，40or20nagtissuerespectively．Result Whensamplequantitywasunder40mg，theintegrity andpurityofRNA canmeetfartherexperimentalrequirements． 。 [KeyWords] RNA；Isolation；Leftventricularmuscle；Rat 纯度高且完整性好的RNA是保证后续逆转录 7596／乙醇，混匀，7500g离心 5min，弃上清，晾 3 酶聚合酶链式反应 (RT-PCR)、Northernblot、cD- rain，加入 15uLDEPC水溶解 RNA沉淀。实验重 NA文库构建等实验的前提。心肌组织难 以碾磨，获 复6次。 得高质量的RNA较困难。本文探讨 1mlTrizol提 1．2．2 电泳分析 各取 10uLRNA样品加人 2uI 取RNA的质量和大鼠心肌取样量的关系。 上样缓冲液混匀，点样于 1 甲醛变性琼脂糖凝胶 中，100V电泳30min左右，观察RNA的完整性。 1 材料与方法 1．2．3 RNA纯度 的测定 测各组 RNA样品260、 1．1 材料 SD大鼠6只，购 自新乡医学院实验动 280nm的吸光度，并计算RNA的纯度。 物中心，体重 180 200g。Trizol试剂购 自Invitro- 2 结果 gen公司；DEPC水、琼脂糖购 自江苏碧云天公司；无 酶枪头、EP管购 自Axygen公司。耐高温器具均180 2．1 大鼠心室肌RNA的电泳图 ℃干烤4h。Uvmini一1240紫外分光光度计购 自日 本岛津公司。 1．2 方法 1．2．1 总 RNA提取 取液氮冻存的80mg、60 mg、40nag、2Omg大鼠心室肌组织于四个预冷的研 钵中，不断添加液氮磨8min成细粉[¨，分别加入到1 图1 大鼠心窒肌甲醛变性琼脂糖电泳 mLTrizol试剂中，裂解 10rain后，12000g离心 1O