改良的悬滴培养法.pdfVIP

意滴碚音- f{是毒 维普资讯 流【 ；三 ～； 四川解剖 学杂 志 约 l6．000。 (r 结构的扫描 电镜的观察 已有文献报道 ，．本文 电镜生物样品的快速制备法 吕银慧 用胰蛋 白酶消化法清楚地观察到表皮深层细 王仁鹏 第三军医大学 重庆 630038 胞的表面结构 ，效果满意 。现报道如下 ：取手 电镜样 品的快速制备术 已有文献报道 ，此技 术环切后 的人包皮皮肤 ，尽量切 除皮下组织 术 已在临床病理诊断上得到较广泛 的应用 ， 及部分真 皮组织 ，余 下皮 片切成 4．0×1． 为 了提高 膜性结构 的反差 ，作者参考 了其有 0mm大小 的组织块 ，置于约 10倍于皮 片体 关文献 ，采用单宁酸一戊二醛 (TAG)作前 固 积的 0．3 胰 蛋 白酶 (不含 Ca抖、Mg。的 D -r卷一定 ，铁氰化钾还原饿酸 (OsFeCN)作后 固定 ， 一Hank’s液配制)，4℃下消化 16h左右 ，用 第 取得了较满意的结果 ，现报道如下：取小鼠十 弯镊将消化后的表皮浅层组织揭下，翻转，并 期 二指肠 、肝 、肾、气管及心室等组织 ，切成小块 作好标记 。固定 ：用 3 戊二醛磷酸缓冲液固 置于 1 单宁酸一2 戊 二醛磷酸缓冲液 内 定 2h4℃。漂洗 ：用 0．1M 磷酸缓冲液漂洗 3 30min；漂洗 3次每次 10rain；1 铁氰化钾一 次 每 次 15min。后 固 定 ：1 OsO．固 定 ’ 1O 锇酸后 固定 4C，30min；室温下继续 固 2h4~C。漂洗 ：0．1M 磷酸缓冲液漂洗 3次 ，每 定 30min；系列丙酮脱水 37～40℃，每一梯度 次 l5min。脱水 ：系列 乙醇脱水 ，每级 l5rain。 5min；丙 酮 一 Epon618(1：1)浸 透 40℃， 置换 ：醋酸异戊酯置换 l5min，临界点干燥 、 30min；包埋剂包埋置于烤箱 内聚合 60~C， 粘托、溅射喷镀后，T一300扫描 电镜观察 。结 30min：80℃，60min；100℃，30min。冷却后 果表 明，表皮浅层细胞经胰蛋白酶消化后被 LKBNova型超薄切 片机切 片，双重 电子染 剥离 ，显示 出深层 的组织结构 ，如基膜 以及不 色 ，JEM一2000EX型电镜观察 。结果与常规 同层次的角朊细胞 ，角朊细胞间可见许多桥 电镜样 品制备术无 明显差异 。线粒体的内外 粒 。此方法操作简单 ，效果满意 。胰蛋 白酶浸 膜及嵴清晰可辨 ，粗面 内质 网、滑面 内质 网、 泡 的 目的是为了减弱细胞与细胞 间、细胞与 Golgi复合体 、溶酶体 、核被膜及核孔等结构 基 膜 问的连接力 ，时间过长 易破坏组织细 保存 良好 。细胞间连接 (如紧密连接、桥粒)、 胞的结构 ，过短不易显露其 内表面，必须掌握 肝细胞 内p一糖原颗粒也清晰可见。此外 ，微 好浸泡时间；OO．固定时间不能过长 ；分离 绒毛和纤毛 的细微结构也保存 良好 。在制样 时需仔细避免人工损伤 。 ¨ 过程中，样品必须新鲜，而且组织块尽量切 II1一 I，改良的悬滴培养法 李秀群 薛庆 小 ，不得超过 lmm。，以便组织充分 固定 。在 保天然 廖德 阳 吴良芳 华西医科大学 脱水过程 中，预先将丙酮置于温箱 内保持在 成都 6l0041 悬滴培养法 (hangingdrop 37。～4O℃，搅拌包埋剂要充分 ，又要 防止 出 culture堤 组织和器官培养 的常规方法 ，最早 现气泡 。此法具