改良脱钙骨切片制作法.pdfVIP

维普资讯 砰 堕京 鸟 7虞吝夸砰 乏 秀，乏震 硼 四川解嗣学杂志 年第5卷第期 ；z一；f下足I爻叉 i 寸叠完 f乙季c圭)墨《右 ， ， I 一6 ， 胎学教研室 广元628017显示骨组织的 f病毒跨神经元迫磉、免疫荧光双标法的 (1f 方法有多种 。一般的的教学标本制作多选用 应用 马玉琼 欧可群 。操高原 陈文玉 。 传统的制片方法即先经脱钙，再行切片染色 王蕾 张军 华茜 ’_科大学组织学与胚胎学 的方法。这种方法步骤较多，也费力 ，效果不 研究室 610041 为进一步探讨视网膜节细 好 ，不适用于大批量标本的制作 。我们经过多 胞 的轴突终末与视交叉上核 (SCN)内 VIP 次实验 ，采用酸性复红一结晶紫块染骨组织， 和 AVP能神经元间的联系，采用假狂犬病 即先染色、再制作教学用长骨磨片 ，取得了成 毒(PRV)跨神经元顺行追踪 及免疫荧光双 功 。其具体方法是 ：取经固定的人长骨，用手 标法 。对成年大 鼠单侧眼球 内缓慢注入 PRV 钢锯锯成 2—3ram 厚 的骨环和骨片 ，尽量达 (Bartha株 、5×l0。PFU ／m1)3I，留针 1O分 到厚度均匀 ，经用 EDTA(依地酸)脱钙后 ， 钟 。动物分别存活 56、72和 96小时 。1 戌 流水冲洗 l一2天 ，浸入 l 酸性复红溶液 2 巴比妥钠腹腔注射麻醉 ，经左心左灌注生理 一 3天(4O℃)。骨片从复红液 中取 出后经蒸 盐水 (每 100ml含肝素 100单位)持续 5分 馏水稍洗 ．再浸入 5 结晶紫溶液中 ，12—18 钟 ，流速 3O一40ml／分钟，冷固定液 (含 4 多 小时后取出，用蒸馏水洗三次 。然后 ，将骨磨 聚 甲醛 、15 苦味酸 ，用 0．1M ／L磷酸 缓冲 片烤干 ，用细磨石磨薄 ，不可加水 ，磨去多余 液配 制 、pH7．4)，开 始流速为 3O～40m1分 的染料 ，镜下观察 ，达到要求即可 。结果骨陷 钟 ，持续 5～7分钟 ，然后降慢到 10ml／分钟 ， 窝 、骨小管呈紫色 ，基质淡红色 ，对 比明显 。用 维持半小时 。开颅取材 、修块 、人上述固定液 这种方法制作骨磨片 ，可减少制片 的环节 ，缩 后 固定一小时，再转入 2O 蔗糖磷酸缓冲液 短制片的时间 ，同时又可减轻劳动强度 ，尤其 过夜 、恒冷箱切片 ，片厚 3Om。免疫荧光双 适用于大批量标本的制作。 ({少／ 标法：含 0．3 Triton、2 驴血清 (NDS)的 ／一种显示尼氏体的简便方法 李秀群 0．OIPBS(pH7．4)稀释混合两种一抗，羊抗 华西医科大学组胚教研室 成都 610041 PRV1t2000，兔抗 VIP或 AVP1：2000，室 用 Hamburger35期来亨鸡胚、摘取腰段背 温 24～48h。二抗分别为驴抗羊 IgG(IRITC 根节 ，用 0．125 胰蛋 白酶消化 (37℃)30分 标 记 )1：100，驴抗兔 IgG(FITC标 记)ll 钟 ，打散成细胞悬液后涂片、稍干后用 4 多 50，用 2％NDS的 0．O1M PBS稀释 ，室温 1． 聚 甲醛或 1O 甲醛 固定 1O分钟 ，自来水 冲 5h。以上各步间均用 0．O1M PBS漂洗 1O× 洗至福尔马林无气味、苏木精染色 lO分钟 ， 3。裱片 ，PBS甘油封片 。免疫荧光双标操作 用 1 盐酸 酒精分 色 9O秒钟 ，常规脱水、透 在暗室里进行 。结果 ：被 PRV标记的细胞呈 明、封固后置显微镜下观察。结果显示 ：神经