西瓜枯萎病拮抗性放线菌的筛选和育种.docVIP

西瓜枯萎病拮抗性放线菌筛选与育种 唐昕莹1,2 （1南京师范大学强化培养学院,南京仙林校区，文苑路1号 210046） （2南京师范大学生命科学学院实验教学中心） 摘要 对由山东泰安棉花耕地和浙江天目山土壤分离得到的放线菌进行筛选、育种，为西瓜枯萎病的生物防治提供潜在的可用菌种本实验利用对峙培养法对土样中分离出的放线菌进行初筛，得到对西瓜枯萎病原菌有拮抗作用的放线菌4株，2010STF6-11、2010ZTF1-19、2010ZTF1-20、2010ZTF1-35。将所得菌种发酵液经离心获得上清液和菌体沉淀，分别经过无菌过滤、对峙培养，以确定抗生素产生位置。最后利用紫外诱变法对原始菌株诱变育种，根据H/C比值选取正突变菌种发酵培养，对发酵液采用梯度稀释法确定其最低抑制浓度（MIC）。结果表明，2010ZTF1-35抗生素产生于菌体外。选取诱变3min、诱变后H/C比值2.0的菌株2010ZTF1-35-11发酵培养，发酵液的最低抑制浓度为1×。 关键词 西瓜枯萎病 生物防治 山东泰安棉花耕地 浙江天目山 紫外诱变 Abstract To provide potential actinomycetes for biological control of fusarium wilt of watermelon,actinomycetes isolated from Taian,Shandong and Tianmu mountain were filtered and bred. We used dual culture method to find out actinomycetes which had antagonistic effects to Fusarium oxysporum.As a result,we got 4 named as 2010STF6-11, 2010ZTF1-19, 2010ZTF1-20 and 2010ZTF1-35. The broth was separated as two parts--supernatant and sediment,both of which were sterile filted and dual cultured to determine the location of antibiotics. Finally, the original strain was mutation bred by UV.New strain was selected according to H / C ratio and the minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by dilution method. The results showed that antibiotics of 2010ZTF1-35 was secreted out of the cell. 2010ZTF1-35-11 which was mutated by UV for 3 minutes was selected and the MIC of fermentation broth was 1 ×. Key words Fusarium oxysporum biological control cotton field of Taian Shandong Tianmu mountain of Zhejiang UV西瓜枯萎病原菌属土传性的病原菌，引起的西瓜枯萎病是一种毁灭性的病害。该病菌通过土壤、种子传播，可在土壤中长期存活，防治困难，严重的地块发病率达80％以上，往往造成绝产[1-3]，给我国的西瓜生产造成严重的经济损失。 对西瓜枯萎病传统的防治方法主要有抗病植株的选育[4]、嫁接[5]、药剂防治[6]和轮作套作[7]等。以上的传统方法对于该病防治都具有一定的作用，但也具局限性。例如，随着西瓜种植面积的增加，土壤资源有限，轮作困难[7]；长期的大面积药物防治易造成土壤污染并诱导病原菌产生抗药性[6][8]。 新型的防治方法着眼于生物防治，由于其副作用小且有效期长而受到广泛关注[9]。近年来国内外已报道发现多种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的细菌、真菌、放线菌。Robert分离的非致病性尖孢镰刀菌在大田实验中能降低病害发生率35％～75％[10]；而我国的李起秦、许煜泉等也分别筛选获得对于尖孢镰刀菌有抑制作用的芽孢杆菌[11]、荧光假单孢杆菌[12]。本组以山东泰安以及浙江天目山两地的土壤为样本，分离筛选拮抗性放线菌并进行诱变育种，旨在获得对西瓜枯萎病原菌有拮抗作用的抗生素高产菌株，为生物防治提供可用菌株。 1 材料与方法