激光捕获显微切割技术及其在口腔医学研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 国外医学 口腔医学分册 2006年 1月第 33卷第 1期 激光捕获显微切割技术及其在 口腔医学研究中的应用 肖长杰综述 李 纾审校 (山东大学 口腔医院牙周病科 山东 济南 250012) 摘【要】单一 目标细胞／组织的分离与获取是分子水平上进行临床及基础研究的关键。激光捕获显 微切割技术可以从复杂组织中快速准确地分离目标细胞，从而获取均一性的样品组分，解决了 组织细胞的异质性问题，使各种研究结果更为准确可靠，尤其在肿瘤生物学等学科中显示了极 大的优越性。本文就其基本原理及在 口腔医学领域的应用作一综述。 关【键词】激光捕获显微切割技术； 口腔癌； 基因表达； 牙齿发育 【中图分类号】 Q336 文【献标识码】 A 个体发育过程 中的组织发生 、分化 以及各种 应软件等组成 。与其它显微切割技术不同之处就 病理状态改变都是多基因调控 的复杂过程 。要从 在于LCM过程 中转运膜与激光的应用。通过 CCD 分子水平上研究其机制，就必须准确、深入地分 摄像头，在计算机屏幕上实时监控待分离的样本， 析特定细胞基因结构和表达 的动态变化 。但研究 并选择所需组织或细胞，然后激活显微镜上的一束 的 目标细胞 (如癌前病变细胞或癌细胞)往往被其 激光，激光束在靶细胞上方转运膜 的一个精确点 他组织环绕，原始组织的异质性极大影响了实验 立即被吸收，转运膜局部升温熔化渗透到切片上 结果的可靠性和准确性 。如何从复杂、不均一的 极微小的组织间隙中，并可在激光脉冲结束 200ms 样 品中获得预期的均一性的、更接近于活体状态 内迅速冷却，与靶细胞结合，移动转运臂，即可 的组分成为实验技术上亟需解决的主要 问题之 使靶细胞从组织切片中分离出来 。把捕获了组织 一 1【1 。 20世纪9O年代中期发展起来的激光捕获显 细胞的膜直接放入 DNA、RNA或酶缓冲液 中，即 微切割技术 (1asercapturemicrodissection，LCM)IZl 可用于PCR、RT—PCR、AP—PCR及蛋白质等成分 能够快速准确地从复杂组织中分离均一的样 品组 的分析12-31。 分，从而消除了因实验选用标本所造成 的偏倚， 1．2 特点 为后续的研究工作奠定了基础 。 目前LCM已成为 激光捕获显微切割技术具有以下4个特点： 众多研究者 获取均 一样 品的理 想工 具之一 。 ① “细微 ”，由于是在显微状态并采用特殊的分离 收集手段，显微切割的对象可以达到微米级，显 1 LCM 的基本原理及特点 微切割的精度可 以达到毫微米级，因而足以捕获 1．1 基本原理 单个细胞，并能使细胞形态保持完好，而且LCM 激光捕获显微切割是一项在显微镜下从组织 并未破坏切片中剩余组织，完全可 以在分子水平 切片中分离、纯化单一类型细胞群、单个细胞或 对相邻细胞 (群)进行对 比分析研究，这是 以往 的 亚细胞结构的技术l31。它是在直接光学显微观察 显微切割方法所无法比拟 的。LCM甚至于可捕获 的基础上，利用激光能量对特定的组织或细胞类 像核仁和包涵体及染色体特异区带这样细微的对 型进行切割，同时用激光脉冲所产生的压力把切 象，并可确保细胞 内分子结构的完整性，成为下 割后的目的样 品弹射到收集帽中富集起来，从而 一 步顺利提取 DNA、mRNA以及蛋