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菌种选育 cerevisiae@163.com 提纲 一、菌种选育方法 1.1 概论 1.2 自然选育 1.3 诱变育种 1.4 杂交育种 1.5 基因工程 1.6 理性化筛选及介绍 二 、应用 1.1、概论 抗生素工业生产有三个主要环节，即菌种、发酵和提炼。这三个环节都对抗生素生产有重要影响，而其中以菌种的影响最大。菌种的优劣不但影响抗生素的产量，也直接影响抗生素产品的质量。 菌种选育(selection strain)的目的是改良或改变菌种的特性，使其符合工业生产或科研的要求。菌种选育过程由三个环节组成：一是使菌种产生变异；二是筛选出变异的菌株；三是使变异菌株的特性得到表达。 选、育 菌种选育包含两方面的要求，一是选到好菌株，二是为好的菌种创造一个最适合的生长环境，从而最大限度的提高发酵单位。因此在菌种筛选中，选和育不可分割，选到好菌种以后，我们还应该为好的菌种进行培养基方面的改良，使菌种能达到最好的生产水平。比如说培养基组分的微调，运用数学方法找到培养基最佳比例。 菌种选育的理论基础 遗传与变异是生命的基本特征，也是菌种选育的理论基础。遗传是指子代和亲代间的连续性、相似性的现象。而子代与亲代间的不连续、差异性的现象叫变异。 微生物由于细胞结构简单，细胞核内多数只有一条染色体，往往以基因突变为主。自发突变频率较低，一般为千万分之一到百万分之一。 DNA和遗传密码 DNA是由多核苷酸聚合形成的，组成核苷酸的碱基包括两种嘧啶碱（胸腺嘧啶T、胞嘧啶C）和两种嘌呤碱（腺嘌呤A、鸟嘌呤G）。其中AT之间通过两个氢键结合在一起。CG之间通过三个氢键结合在一起。 DNA分子由四种不同碱基组成，三个碱基决定一种氨基酸，称为三联密码。 DNA →mRNA →氨基酸→蛋白质 生物性状过程：遗传信息→酶→反应→性状 1.2自然选育 抗生素产生菌在使用和保藏过程中，由于细胞内或环境因素的影响，不可避免的要发生变异。这种变异是自然发生的，是不定向的、是缓慢进行的。主要表现为产量降低、产孢子能力减退、菌落形态不纯、存活能力下降、产色素能力改变等。 为了保证纯种生产、稳定生产和提高产量，菌种工作者要进行菌种复壮和自然选育工作。 什么是自然选育 自然选育是一种纯种选育方法。它利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离，筛选排除衰退型菌株，从中选择维持原有生产水平的菌株。因此，它能达到纯化、复壮菌种，稳定生产的目的，生产上将该方法称为自然分离。自然选育有时也可用来选育高产量突变株，不过这种正突变的几率很低。 自然选育流程 生产菌种斜面 制备单孢子悬浮液 分离出单菌落，移种 斜面种子(初筛斜面) 摇瓶初筛 高产菌株 沙土管保藏 斜面种子 摇瓶复筛 高产纯化株 生产试验 进一步选育或保藏 1）单孢子悬浮液的制备：用无菌生理盐水或者无菌水制备单孢子悬浮液，在显微镜下计数，也可经稀释后在平板上进行活菌计数。 2）分离及单菌落培养：根据计数结果，定量稀释后制成50~200万个单细胞/ml的菌悬液，取适量加到平皿培养基上，培养后长出分离的单菌落。按丝状真菌、放线菌菌落大小不同，分离量以5~20个菌落/平皿为宜。 3）筛选：将分离培养后的各型单菌落，接斜面培养，成熟后接入发酵瓶，测定发酵单位的过程，称为筛选。可以分为初筛、复筛两个过程。 初筛系指初步筛选，以多量筛选为原则。因此，某些菌株，初筛可以用不母瓶，将斜面直接接入发酵瓶，测其产量。 复筛是对初筛得到的高产菌株的复试，以挑选出稳定高产菌株为原则。每一初筛通过斜面可进2~3只摇瓶，并重复3~5次，用统计分析法确定产量水平。 初、复筛都要同时以生产菌株作对照。复筛选出的高单位菌株至少要比对照菌株产量提高5%以上，并经过菌落纯化、摇瓶单位波动情况，以及糖、氮代谢等的考察，合格后方可在生产罐上试验。复筛得到的高单位菌株应制成沙土管、冷冻管或液氮管进行保藏。 琼脂块筛选法 这是一种简便、迅速的初筛方法。将单菌落连同其生长培养基(琼脂块)用打孔器取出，培养一段时间后，置于鉴定平板以测定其发酵产量。琼脂块筛选法的优点是操作简便、速度快。但是，固体培养条件和液体培养条件之间是有差异的，利用此法所取得的初筛结果必须经摇瓶复筛验证。 筛选自动化和筛